Resumo

Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) são agentes de diarreia em todo o mundo. A interação da adesina intimina com seu receptor, Tir, injetado pelo Sistema de Secreção Tipo 3 (SST3), produz lesão attaching-effacing (AE). Previamente, demonstramos que a amostra de aEPEC 1551-2 invade células intestinais T84 diferenciadas, preferencialmente, pela superfície basolateral. Para alcançar esta superfície, Salmonella, Shigella e Yersinia fixam-se às células M via fímbria tipo 1 (T1P). Neste trabalho, avaliamos a contribuição de intimina, Tir, SST3 e T1P da aEPEC 1551-2 na infecção de diferentes modelos de enterócitos, construindo os respectivos mutantes nos genes eae, tir, escN e fimA. Plasmídios recombinantes pFimA e pEscN foram utilizados para complementar as amostras dos respectivos mutantes. EPEC típica (tEPEC) E2348/69 foi utilizada como controle de aderência. Células Caco-2 diferenciadas foram infectadas com as amostras, e submetidas a ensaio de proteção com gentamicina. A translocação bacteriana (TB) in vitro foi avaliada pela infecção de células M-like obtidas pelo co-cultivo de células Caco-2 e células Raji-B, em sistema Millicell (Millipore), e quantificação de bactérias presentes na sua câmara inferior. A interação bacteriana no modelo ex vivo foi analisada por microscopia eletrônica, após inoculação de fragmentos de íleo de ratos Wistar-EPM. O potencial de TB in vivo foi avaliada pelo confinamento de suspensão bacteriana entre o duodeno e íleo de ratos (n=5/amostra), com ligaduras. Linfonodos mesentéricos (LNM), fígado e baço foram cultivados para quantificação da TB. Verificou-se que 1551-2 invade células Caco-2 com maior eficiência (9,04%±1,62) que tEPEC E2348/69 (1,57%±0,42) (P<0,05) ou que o mutante deficiente em T1P (5,39±0,37)(P=0,25). A presença de células M-like aumenta a translocação da aEPEC 1551-2 de 119,6 UFC±75,7 (em células Caco-2) para 2869±762,1 (P<0,05) (em células M-like). Foram ainda observadas lesões AE nos enterócitos, nos fragmentos de biópsia, e a translocação do mutante em T1P não difere de 1551-2, nem da amostra complementada em LNM (6,6 UFC±3,14 e 7,82±2,08, P=0,98; 6,6 UFC±3,14 e 4,82±0,03, P=0,34) e fígado (0,001±0,0005 e 0,045±0,042, P=0,32; 0,001±0,0005 e 0,021±0,013, P=0,05). Os mutantes eae, tir e escN perderam estas características. Estes achados sugerem que, na aEPEC 1551-2, intimina, Tir e o SST3 contribuem para o estabelecimento de lesão AE, invasão de enterócitos , translocação de células M-like e alcance de sítios extraintestinais, enquanto a T1P parece não contribuir para estes processos.