Resumo

Yarrowia lipolytica é um fungo oleaginoso, dimórfico e estritamente aeróbio pertencente ao filo Ascomycota, classe dos Saccharomycetes. É uma das leveduras “não convencionais” mais estudadas para aplicações industriais, postas sua capacidade inerente de assimilação de substratos hidrofóbicos, secreção de proteases, lipases, esterases e RNases, produção de ácidos orgânicos (i.e. ácido cítrico, isocítrico e alfa-cetoglutárico) e mais recentemente, com o sequenciamento do seu genoma, como plataforma de expressão de proteínas heterólogas. Nas aplicações industriais nas quais se visa alta produção de biomassa, emprega-se extrato de levedura e peptona bacteriológica como promotores do crescimento, o que torna o meio de cultura complexo e indeterminado. Em aplicações mais refinadas (i.e. produção de proteínas heterólogas de aplicações médicas), faz-se necessário um controle rigoroso das características químicas dos meios de cultivo empregados e que, sobretudo, sejam livres de proteínas indesejáveis. A literatura aberta descreve somente os perfis cinéticos de crescimento de Y. lipolytica em meio complexo, cabendo a esse trabalho a avaliação da influência de diferentes fontes de carbono (comercialmente viáveis para aplicações industriais) no crescimento da linhagem de interesse Y. lipolytica IMUFRJ 50682 e de referência Y. lipolytica W29, em meio definido. Para tal, em primeira instância, investigaram-se as fontes de carbono assimiláveis em meio de cultura sólido. Placas contendo meio definido, com uma única fonte de carbono e energia (i.e. glicose, xilose, sacarose e glicerol) foram usadas nessa etapa. Observou-se que as linhagens estudadas apresentavam crescimento normal em glicose e glicerol e não apresentavam crescimento apreciável em xilose. Em sacarose, as linhagens apresentaram crescimento moderado, fato esse que contraria o que é descrito na literatura, visto que Y. lipolytica não expressa a enzima invertase (necessária na assimilação desse dissacarídeo). Em segunda instância, selecionou-se o melhor meio de cultivo definido, dentre todos os descritos na literatura, para obtenção dos perfis cinéticos em meio líquido, empregando frascos com defletores para uma aeração mais eficiente. As fontes de carbono investigadas nessa etapa foram glicose, sacarose, glicerol e etanol. Foi possível determinar os perfis cinéticos de crescimento e consumo de substrato para todas as fontes de carbono, exceto sacarose, na qual não se observou crescimento apreciável. As linhagens de Y. lipolytica, em meio definido com glicose como única fonte de energia e carbono, apresentam crescimento mais lento e melhor conversão de substrato em biomassa (com baixa produção de metabólitos extracelulares) se comparadas à levedura Saccharomyces cerevisiae, no entanto, diferentemente da anterior, as linhagens selvagens de Y. lipolytica são incapazes de assimilar sacarose.