Resumo

O gênero Lactobacillus é o protótipo dos microrganismos benéficos pertencentes ao microbioma intestinal, devido a inúmeras atividades de espécies desse gênero, que auxiliam a manter a integridade orgânica Muitas destas atividades são desencadeadas por ações mecânicas da bactéria, pela competição direta por nicho ou nutrientes, ou então por produtos como bacteriocinas e ácidos graxos. Neste sentido, este estudo teve por objetivos obter e purificar fração proteica de 55kDa de cultura de Lactobacillus lactis, e testar se havia atividade antimicrobiana, por efeito microbicida ou microbiostático. Cepas de L.lactis, devidamente identificadas, foram reativadas em Ágar BHI, com 3 incubações sucessivas de 24h/37ºC. Em seguida, foi preparada suspensão bacteriana em solução salina fisiológica tamponada (PBS), na densidade de 1x10⁵ células/mL, inóculo em Caldo Nutriente-Tamponado, incubado por 72h/37ºC. Logo após, o caldo foi filtrado em membranas filtrantes de 0,22 µm de diâmetro de poro, e o filtrado obtido dializado, dessecado e liofilizado. O liofilizado foi ressuspenso em (PBS), para fracionamento e purificação em cromatografia líquida, seguida de caracterização em espectrômetro de massa. Obtida a fração 55kDa foi ressuspensa em PBS (concentrações de 200, 100, 50, 25, 12,5 µg/mL), para uso em ensaios de atividade antimicrobiana, pelas técnica de diluição em tubo seguida de pour-plate, contra E. coli, S. aureus, P. aeruginosa, B. cereus, A. fumigatus, C. neoformans e C. albicans. Nestas condições, embora a proteína de 55 kDa, tenha apresentado concentração inibitória mínima (CIM) de 12,5 µg/mL, com 03 cepas fungicas, após plaqueamento em pour-plate, foram recuperadas unidades formadoras de colônias (UFCs) para todos os fungos e concentrações testadas da proteína, sugerindo efeito fungistático. Com bactérias Gram (-) e S.aureus, a CIM foi de 50 µg/mL, e B. cereus, foi de 100 µg/mL. Novamente, após pour-plate, houve a recuperação de número consistente de UFCs para todos as bactérias e concentrações testadas da proteína, reforçando a sugestão de efeito microbiostático. Ações benéficas de L. lactis, são múltiplas e multifacetadas. Na atualidade, microrganismos presentes no microbioma intestinal, são entendidos como “usinas” de metabólitos biologicamente ativos. A proteína 55 kDa apresenta atividades antimicrobianas com certeza, porém parece que age por efeito transitório, sugerindo que talvez iniba algum mecanismo metabólico, comum a bactérias e fungos.