Resumo

Zigomicose é uma infecção oportunista invasiva causada por fungos da classe Zygomycetes, ordem Mucorales, com mau prognóstico em pacientes imunocomprometidos. Os principais agentes são espécies de Rhizopus, Mucor, Rhizomucor e Cunninghamella e a correta identificação é fundamental para o tratamento adequado dos pacientes, uma vez que gêneros e espécies têm comportamentos diferenciados frente aos antifúngicos. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi identificar cepas de zigomicetos pela metodologia clássica e comparar aos resultados obtidos pela técnica de sequenciamento. Foram selecionadas 10 cepas classificadas morfologicamente, de acordo com a literatura disponível, nos seguintes gêneros: Cunninghamella bertholletiae (LIF 299, 300, 301), Rhizopus sp. (LIF 1046, 1143, 1455, 1820), Syncephalastrum sp. (LIF 1834), Absidia (Lichtheimia) sp. (LIF 1237) e Rhizomucor sp. (LIF 1832). As estruturas características presentes nas lâminas foram fotografadas. A identificação molecular foi realizada por sequenciamento da região D1/D2 constituinte do DNA ribossomal 5.8S utilizando os iniciadores NL1/NL4. As sequências obtidas foram alinhadas no programa ATSQ (Japan Software Inc., Japão) e a homologia com outras sequências foi avaliada com a ferramenta BLAST. A análise molecular classificou as cepas LIF 299, 300 e 301 como pertencentes à espécie Cunninghamella bertholletiae, LIF 1046, 1143, 1237, 1455 e 1832 como Rhizopus orizae, LIF 1820 como Rhizopus stolonifer e LIF 1834 como Syncephalastrum racemosum. Quando comparado à identificação clássica, o sequenciamento confirmou a espécie das três cepas de Cunninghamella bertholletiae e possibilitou a determinação da espécie para cepas pertencentes aos gêneros Syncephalastrum e Rhizopus. Foi observada discordância somente entre os resultados de LIF 1237 e 1832, classificadas sob o aspecto morfológico como Absidia (Lichtheimia) sp. e Rhizomucor sp., respectivamente, e como Rhizopus orizae por sequenciamento. A literatura relata casos de divergência entre estas duas metodologias e, uma vez que as informações disponíveis nos bancos de dados ainda são restritas, algumas delas poderiam ser atribuídas a este fato. De qualquer modo, estes dados demonstram que a aplicação das técnicas moleculares na identificação dos zigomicetos permite um diagnóstico com maior rapidez e precisão. No entanto, os bancos de dados precisam de maior número de sequências depositadas, em especial destes micro-organismos, para permitir a correta identificação de Mucorales.