Resumo

A lactase hidrolisa moléculas de lactose formando glicose e galactose, que são dois monossacarídeos mais doces, mais digestivos e mais solúveis do que a lactose. A lactase tem grande importância para a indústria de laticínios, na redução de cristalização, produção de iogurtes, queijos maturados, e produtos especiais para pessoas intolerantes a lactose. Tendo em vista a importância desta enzima, processos para produção de lactase vêm sendo pesquisados por vários autores, com o objetivo de selecionar espécies altamente produtoras e meios de cultura favoráveis a obtenção de uma enzima com alta atividade. Dentre os microrganismos destaca-se o Kluyveromyces marxianus. Visto isto, esse trabalho teve como objetivo extrair e realizar a caracterização cinética da lactase produzida por Kluyveromyces marxianus CCMB 322 através da determinação da constante de Michaelis-menten(Km) e a determinação da velocidade máxima de reação (Vmax). A levedura Kluyveromyces marxianus foi ativado em meio ágar YM, e inoculado em meios líquidos com duas diferentes composições (um com Extrato de levedura 3g/L, Extrato de malte 3g/L, Peptona 5g/L, glicose 10g/L preparado em tampão fosfato 0,2M, pH 6,0, e outro contendo Extrato de levedura 3g/L, Extrato de malte 3g/L, Peptona 5g/L, Lactose10g/L preparado em tampão fosfato 0,2M, pH 6,0). A enzima intracelular foi extraída, e a atividade enzimática foi calculada usando o substrato o-nitrofenil-β-D-galactopiranosídeo (ONPG), e os valores de Km e Vmax foram determinados. O ensaio enzimático aplicado demonstrou que quanto maior a concentração do substrato, maior a atividade enzimática. A curva de Michaelis-menten foi definida usando o inverso das concentrações de substrato pelo inverso da atividade enzimática. Os valores de Km e Vmax da lactase produzida por Kluyveromyces marxianus CCMB 322 são respectivamente 3,95mM e 0,25 U.mL-1, demonstrando assim grande afinidade da lactase pelo substrato. A Kluyveromyces marxianus CCMB 322 é uma levedura isolada do semi-árido e bastante promissora no que diz respeito à sua exploração na produção de enzimas de interesse farmacêutico. A lactase pode ser produzida e extraída apresentando boa atividade, sendo uma opção para utilização na produção de lactase industrialmente. A lactase produzida por Kluyveromyces marxianus isolado do simi-árido baiano, demonstrou ser superior a outras lactases produzidas por outras leveduras, tendo uma maior afinidade da enzima ao substrato.