Resumo

O receptor do tipo Toll 3 (TLR3) possui importante papel na resposta anti-viral, levando a produção de IFNI e IL-10. Além disso, TLR3 é necessário para a produção de NO e TNF-α induzida por L. donovani. Promastigotas de L. panamensis induzem a produção de TNF-α e o aumento da expressão de TLR1, TLR2, TLR3 e TLR4 em macrófagos. Recentemente foi demonstrado que, L. guyanensis isoladas de lesões metastáticas, possuem elevada carga do vírus LRV1, induzindo citocinas próinflamatórias e quimiocinas em macrófagos, mediada por TLR3. Assim, investigamos o papel de TLR3 na modulação da infecção por L. amazonensis. Macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6 selvagens (WT) ou Knockout para TLR3 (TLR3^-/-) foram plaqueados e, após 24h, foram infectadas com L. amazonensis. As lamínulas foram coradas com Giemsa, para determinar o índice de infecção, ou submetidas à reação com anticorpos para TLR3, TRIF e LAMP1. Reações de PCR em Tempo Real para quantificar os níveis de transcritos para IFN-β e IL-10, foi realizado com o cDNA sintetizado a partir do RNA extraído de macrófagos infectados com L. amazonensis. A proliferação da L. amazonensis foi reduzida em 50% nos macrófagos TLR3^-/-. Análises in vivo demonstraram que animais TLR3^-/- são mais resistentes a infecção. Ensaios de imunofluorescência indicaram que TLR3 e TRIF, são recrutados para o vacúolo parasitófoto da L. amazonensis. Esses resultados foram confirmados através de reconstruções tridimensionais. A infecção por L. amazonensis não altera os níveis de TLR3 nos macrófagos, mas induz sua ativação por clivagem. Este processamento se mostrou essencial à sinalização. Análises da expressão de IFN-β e IL-10 indicaram que macrófagos WT infectados com L. amazonensis aumentam a expressão destas citocinas, diferente dos macrófagos TLR3^-/-, que reduzem a capacidade de responder à infecção. Considerando que a proteína cinase R (PKR) também induz a produção de IFNI e IL-10, investigamos a cooperação entre TLR3 e PKR na produção destas citocinas. A produção de IFN-β e IL-10 depende de PKR e TLR3, indicando um efeito aditivo entre essas vias. Porém, TLR3 aparenta ser mais importante para a expressão de IL-10. O tratamento dos macrófagos TLR3^-/- com IFN-α recombinante subverte parcialmente o índice de infecção. Nós demonstramos o papel de TLR3 na resposta imune da L. amazonensis em um modelo sem vírus, abrindo perspectivas para a investigação deste receptor como um importante fator no curso de infecções por protozoários.