Resumo

Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista de grande importância em infecções respiratórias adquiridas em ambiente hospitalar. Entre os fatores de virulência deste microrganismo, destaca-se ExoU, uma proteína com atividade tipo fosfolipase A2 (PLA2), citotóxica e pró-inflamatória, que é injetada diretamente no citosol de células hospedeiras pelo sistema de secreção do tipo III. A ativação de ExoU depende de co-fatores presentes nas células hospedeiras, como a enzima superóxido dismutase tipo 1 (SOD1), relacionada à resposta ao estresse oxidativo. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de ExoU na indução de estresse oxidativo e da resposta antioxidante durante a infecção de células epiteliais respiratórias por P. aeruginosa. Para isso, culturas de células epiteliais respiratórias humanas da linhagem A549 foram infectadas com a cepa parental PA103, com a mutante não produtora de ExoU, PA103ΔexoU, ou com a mutante produtora de ExoU sem atividade PLA2, PA103ΔUT/S142A, por diversos períodos de tempo, para dosagem dos níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), óxido nítrico (NO) e peroxinitrito, por ensaio fluorimétrico, determinação do índice de peroxidação de lipídeos, da formação de 8-isoprostano e da atividade de SOD1, catalase e NQO1, por ensaio colorimétrico, e da concentração de GSH por luminescência. Nossos resultados mostraram que, após 1 hora de infecção, ExoU aumentou significativamente a produção de EROs, NO e peroxinitrito, levando à peroxidação de lipídeos de membrana e à formação de 8-isoprostano, 6 horas após a infecção. Além disso, a infecção, por 48 horas, com a cepa PA103, produtora de ExoU, mas não com sua mutante PA103ΔexoU, estimulou a atividade de SOD-1 e reduziu os níveis de GSH. Não foram detectadas diferenças na atividade de catalase ou NQO1, embora o tratamento com dicumarol, considerado um inibidor de NQO1, tenha reduzido significativamente a peroxidação de lipídeos de membrana. Em conjunto, estes resultados mostram que ExoU contribui para o estresse oxidativo, levando ao aumento da resposta antioxidante durante a infecção por P. aeruginosa.