Resumo

O uso de bactérias entomopatogênicas, como o Bacillus thuringiensis, como inseticidas biológicos tem se mostrado uma das alternativas viáveis ao uso de inseticidas sintéticos, devido a sua atividade entomopatogênica ser atribuída, principalmente, aos cristais paraesporais, os quais são compostos de um ou mais tipos de proteínas tóxicas, como as Cry, que possuem especificidade para insetos de diferentes ordens. Uma outra alternativa ao controle biológico são as plantas-Bt, as quais são protegidas do ataque de insetos praga, inserindo-se no genoma das mesmas, genes cry que permitem que a planta torne-se resistente ao ataque dos insetos, levando-os à morte antes que eles possam causar danos às plantas e consequentes perdas, não necessitando a aplicação de inseticidas para o controle das pragas sensíveis às proteínas Cry. Sendo assim, se faz necessário a busca por novos genes cry para serem utilizados na produção de novas plantas-Bt. Neste trabalho foram utilizadas técnicas moleculares, associadas às ferramentas de bioinformática, visando à obtenção da sequência completa de um gene cry de uma linhagem de B. thuringiensis e sua posterior clonagem. As linhagens de B. thuringiensis(BR09 e BR145), isoladas de solo, foram selecionadas por PCR através de iniciadores degenerados. O gene cry1I foi identificado nessas linhagens através de sequenciamento e as sequências obtidas foram homólogas a região central do gene. Sendo assim, novos iniciadores foram selecionados à partir de regiões consenso, homólogas às sequências de outros genes cry1I, visando obter as sequências completas das extremidades dos genes pela metodologia primer walking. Foram selecionados dois pares de iniciadores, os quais permitiram a extensão das sequências completas dos genes, sua classificação em relação a outros genes cry dentro de um banco de sequências desses genes e a identificação destes como cry1Ia. Neste estudo, obteve-se a clonagem do gene cry1Ia completo das linhagens BR09 e BR145 e a sequência completa desse gene de B. thuringiensis BR145, bem como a sequência de aminoácidos da proteína Cry1Ia de B. thuringiensis BR145 composta por 719 aminoácidos e com massa equivalente a 81 kDa.