Resumo

Introdução: A leptospirose é uma zoonose mundial causada por bactérias espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais e são liberadas ao ambiente externo pela urina. Acomete tanto animais domésticos quanto silvestres e o homem. Os mecanismos pelos quais as leptospiras colonizam o organismo e causam a doença não são bem compreendidos. A identificação de proteínas capazes de mediar as interações com o hospedeiro durante a infecção é essencial para o entendimento da patogênese da leptospirose e no desenvolvimento de ensaios diagnósticos e vacinas mais eficientes. Objetivo: Estudar a interação de seis prováveis lipoproteínas de membrana externa de leptospira com as proteínas do hospedeiro: colágeno I, colágeno IV, elastina, fibrinogênio, fibronectina celular, fibronectina plasmática, laminina e plasminogênio. Materiais e Métodos: As proteínas recombinantes expressas na fração solúvel (Lp25, Lp21 e Lp22) e na fração insolúvel (Lp11, Lp35 e Lp30), obtidas de lisados totais induzidos de E. coli, foram purificadas por cromatografia utilizando-se resina de afinidade à níquel e posteriormente analisadas por gel SDS-PAGE. O ensaio de interação das proteínas recombinantes com as proteínas de hospedeiro e o ensaio de especificidade e curva dose-resposta foram realizados por ELISA. O DNA genômico de algumas espécies de leptospiras patogênicas e uma não patogênica foi isolado e digerido com a enzima de restrição EcoRV, posteriormente através do southern blot, foi realizado um estudo de conservação gênica. Resultados e Discussão: Cada proteína recombinante purificada apresentou uma banda majoritária com peso molecular esperado. Os experimentos de adesão demonstraram que as proteínas recombinantes apresentaram maior interação com os componentes do hospedeiro de maneira dose-dependente foram Lp21, Lp22 e Lp30. Estas aderiram à fibronectina plasmática, laminina e plasminogênio, além desses componentes, a Lp22 e a Lp30 também interagiram com colágeno IV. A Lp22 aderiu à elastina e ao fibrinogênio. Os genes que codificam as prováveis lipoproteínas em estudo foram encontrados somente nas leptospiras patogênicas. Em conjunto, estes resultados demonstraram que estas proteínas devem contribuir na adesão das leptospiras aos tecidos do hospedeiro. E, também poderiam ser candidatas a antígenos vacinais, uma vez que estão presentes nos sorovares da espécie L. interrogans, que é a mais prevalente causadora da leptospirose humana.