Resumo

Poli-3hidroxibutirato (P(3HB)) é um poliéster com propriedades mecânicas e térmicas similares ao polipropileno. É sintetizado e armazenado intracelularmente na forma de grânulos lipofílicos de reserva de carbono e energia para os microrganismos produtores. Bioprocessos para obtenção de P(3HB) são divididos em fase de multiplicação celular e fase de acúmulo do polímero, quando é geralmente proporcionado excesso de carbono e limitação de alguns nutrientes essenciais; a essas segue-se a fase downstream ou pós-fermentativa, com extração e purificação do produto. Diversos estudos têm sido desenvolvidos visando otimizar os processos de extração de PHBs, que ainda são bastante onerosos. O objetivo deste trabalho aperfeiçoar a metodologia de extração por clorofórmio do P(3HB) produzido por Ralstonia solanacearum. Foram preparados inóculos em meio Yeast Malt em frascos Erlenmeyers de 250mL, contendo 80mL de meio e 20mL de pré-inóculo, incubados a 28°C e 150rpm por 24h em agitador orbital. Para fase de acúmulo foi utilizado meio mineral em Erlenmeyers de 500mL contendo 160mL de meio e 40mL de inoculo contendo 3,6×10¹⁰UFC.mL^-1, incubados em agitador orbital a 28°C e 200rpm por 72h. O caldo fermentado foi centrifugado a 10000×g por 15min, o pellet ressuspenso em solução salina 0,89%, recentrifugado por 10min e a massa celular obtida seca em estufa a 56°C. A extração foi realizada em frascos de Duran utilizando clorofórmio e massa celular seca na proporção de 40:1 (v/m) e volume de 20mL e agitação magnética a 58°C em diferentes tempos (1h, 30 e 15min). O conteúdo foi transferido para funil de separação e adicionados 20mL de água destilada para formação das fases, sendo a orgânica transferida para placa de Petri, posteriormente mantida tampada para lenta evaporação do solvente e formação do biofilme. Os filmes obtidos nos diferentes tempos foram pesados para o cálculo de rendimento, fotografados e analisados por Espectroscopia no Infravermelho. Os rendimentos diferiram significativamente; o maior rendimento, 45,5%, foi obtido no tempo de 30min e o menor em 1h, 35,3%. Todos os espectros apresentaram bandas características do P(3HB), confirmando a identidade química dos biofilmes, que ficaram com texturas flexíveis. A flexibilidade dos filmes aumentou com o tempo de agitação utilizado; a cor dos filmes não sofreu influência do tempo de agitação durante a extração. Assim, selecionou-se o tempo de 30min, que resultou em maior rendimento e flexibilidade intermediária.