Resumo

Lipases (E.C. 3.1.1.3) microbianas têm despertado o interesse biotecnológico, devido as suas características de biocatálise. Micro-organismos de origem marinha estão sujeitos a fatores que interferem em seu crescimento, como temperatura, pressão, salinidade, pH, concentração de metais, concentração de oxigênio e nutrientes, além das diferentes combinações dos mesmos, exigindo um sistema metabólico robusto, extremamente hábil sob condições de estresse, o que confere à enzima propriedades específicas para aplicação biotecnológica. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a produção de lipase por Trichoderma sp CBMAI 1229 em diferentes condições de cultivo por meio do delineamento experimental (software STATISTICA 7.0). Após ensaios quantitativos da produção de lipase por 6 fungos filamentosos isolados da costa brasileira, a cepa Trichoderma sp apresentou os melhores resultados e foi selecionada para estudos de otimização da produção enzimática. Inicialmente, realizou-se o delineamento experimental de Plackett Burman (PB) para avaliar 10 variáveis independentes, matriz de 16 ensaios + 4 pontos centrais. Utilizou-se 4 fontes de nitrogênio: extrato de levedura, peptona, sulfato de amônio e nitrato de amônio; 3 fontes de carbono: azeite, óleo de soja e de óleo de girassol; além das variáveis inóculo, temperatura e pH do meio de cultura. Os experimentos foram conduzidos por 144 h a 25ºC e 150 rpm. A atividade enzimática foi determinada a 37ºC em pH 7,0 pela hidrólise do p-nitrofenil palmitato. Das 10 variáveis utilizadas no ensaio PB, apenas as variáveis: óleo de girassol, extrato de levedura e peptona apresentaram efeito estatisticamente significativo (p<0,1) positivo, aumentando a produção de lipase de 9,72 U.mL-1 no meio basal para 49,27 U.mL-1. Essas 3 variáveis foram então selecionadas para um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR3). As variáveis extrato de levedura e peptona apresentaram efeito estatisticamente significativo (p<0,1) positivo. O óleo de girassol não apresentou efeito estatisticamente significativo. Os resultados mostraram que os ensaios ficaram próximos do ponto de otimização, principalmente a concentração de extrato de levedura e peptona. A produção de lipase aumentou de 9,72 U.mL-1 para 53,64 U.mL-1. O planejamento experimental foi satisfatório e essencial para a otimização da produção de lipase, aumentando a produção da enzima em 5,2X quando comparado ao meio basal. Apoio: Fapesp, CNPq e CAPES