Resumo

Durante o processo de interação patógeno-hospedeiro ambos os organismos envolvidos sofrem uma ampla reprogramação genética, facilmente observada pelas mudanças no padrão de expressão de inúmeros genes, o que vem mostrando ser crucial para o estabelecimento da patogenia. Dentre os inúmeros genes com expressão alterada no hospedeiro encontram-se aqueles que codificam microRNAs (miRNAs), um grupo de pequenas moléculas de RNA regulatórios atuantes nos mais diversos processos celulares, incluindo a regulação de respostas inflamatórias. Embora vários trabalhos venham mostrando a importância de miRNAs na resposta imune de hospedeiros mamíferos a bactérias e vírus, pouco se sabe a respeito do papel desses reguladores em infecções fúngicas. As doenças fúngicas sistêmicas são apontadas como um problema de saúde mundial e as pesquisas que abordam os mecanismos de interação fungo-célula hospedeira são de grande relevância médica. Nesse sentido, buscamos analisar o papel de miRNAs na resposta imune inata de hospedeiros murinos suscetíveis e resistentes à infecção por Paracoccidioides brasiliensis, o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), considerada a micose sistêmica de maior prevalência na América Latina. Os ensaios de infecção foram realizados utilizando-se macrófagos peritoneais murinos das linhagens A/J e B10.a, resistentes e suscetíveis à PCM, respetivamente, e leveduras do isolado Pb18 de P. brasiliensis. Células hospedeiras foram cultivadas por 6 horas em presença ou ausência de leveduras na proporção 2:1 (macrófagos:leveduras). Após esse período de interação o sobrenadante das culturas foi coletado para dosagem de citocinas por meio de ELISA e o RNA dos macrófagos foi extraido para avaliação das variações nos níveis de transcritos de cinco miRNAs - 125b, 132, 146a, 155 e 455 - por RT-PCR em tempo real. Os níveis de pri-miRNA 155, molécula primária precursora desse miRNA maduro, também foram avaliados com o objetivo de analisar o efeito da infecção sobre diferentes etapas no processo de biogênese do miRNA. Todos os miRNAs avaliados mostraram um aumento no acúmulo de transcritos em resposta à infecção fúngica por P. brasiliensis, nas duas linhagens de camundongo utilizadas. Além disso, a interação patógeno-célula hospedeira alterou o padrão de expressão de citocinas, conforme esperado. Esses resultados sugerem, pela primeira vez, a participação de miRNAs na regulação de vias envolvidas na resposta imune inata à P. brasiliensis.