Resumo

Clostridium difficile é considerado um dos principais agentes etiológicos da diarréia bacteriana associada ao uso de antimicrobianos. Quando um indivíduo susceptível se expõe ao C. difficile, a colonização é primeiramente promovida pelas ações das proteínas de superfície. Danos nos enterócitos ocorrem devido a ação das toxinas produzidas pelo patógeno. Vários estudos tem examinado o impacto provocado por concentrações subinibitórias de antibióticos sobre a produção das toxinas A e B, sendo apontados como responsáveis pelo aumento na expressão dessas toxinas pela espécie. Por outro lado, pouco se tem investigado sobre a interferência dos antibióticos no que se refere à produção das proteínas de superfície do microrganismo. Este projeto tem como objetivo avaliar a expressão de diferentes proteínas da superfície celular do C. difficile, utilizando as cepas brasileiras HU09, SJ1, 1598 e as cepas 630 e BI/NAP1/027, como padrões de comparação, quando expostas ou não a concentrações subinibitórias de antibióticos. Para tanto, foi realizada a determinação da concentração mínima inibitória dos antibióticos clindamicina e levofloxacino, utilizando fitas de E-test, frente às células vegetativas do patógeno. De posse da MIC, foram obtidas frações ricas em proteínas de superfície, através do método de extração com glicina em meio ácido, após o crescimento do microrganismo na presença e na ausência de concentrações subinibitórias dos antibióticos citados. O concentrado de proteínas obtido foi dosado e quantidades iguais foram submetidas à eletroforese em gel de SDS-PAGE. As proteínas que sofreram alteração significativa foram cortadas do gel, passaram pelo processo de digestão com tripsina e serão analisadas por meio da espectrometria de massa (MALDI-TOF/TOF) para identificação e sequenciamento. Os espectros dos peptídeos obtidos serão analisados no algoritmo Mascot e os dados validados com auxílio do Scaffold. O gel de SDS-PAGE mostrou alterações na expressão das proteínas de todas as cepas avaliadas, sendo as cepas SJ1 e 1598 as mais modificadas. Além disso, foi possível perceber maiores alterações na presença do antibiótico clindamicina. O estudo mais aprofundado destes fatores de colonização tem grande importância para a melhor elucidação da patogênese da infecção pelo C. difficile.