Resumo

Introdução: A rápida identificação de BPCs é de suma importância para a implementação de terapia adequada e de medidas de controle. Para este fim, pesquisadores franceses recentemente desenvolveram o Carba NP test. No entanto, uma das etapas deste ensaio envolve o uso de um tampão de lise celular importado e oneroso, tornando-o pouco acessível a muitos laboratórios brasileiros. O objetivo deste estudo foi padronizar modificações no Carba NP test de forma a substituir o tampão de lise por sonicação e, para compensar este processamento adicional, eliminar a etapa de centrifugação. Materiais e Métodos: Um total de 14 bactérias produtoras de enzimas das famílias IMP, VIM, SPM, GIM, SIM, NDM, KPC e GES-5, incluindo enterobactérias, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii, foram incluídas como controles positivos. Escherichia coli J53 e ATCC 29522 foram empregadas como controles negativos. Uma alça de 10µl repleta com a amostra-teste crescida em ágar Müeller-Hinton foi inoculada em 500µl de Tris-HCl e a suspensão foi sonicada. Em seguida, alíquotas de 30µl do sobrenadante da amostra foram inoculadas em 100µl de vermelho de fenol+ZnSO₄ e também em 100µl vermelho de fenol+ZnSO₄+imipenem. Resultados: Nos poços contendo imipenem, a presença de carbapenemase resultou em hidrólise do antimicrobiano e liberação de ácido. A acidez acarretou na mudança da cor do indicador de pH para amarelo, possibilitando a visualização da reação. Todas as BPCs testadas apresentaram resultados positivos, comprovando que o uso do sonicador foi eficaz para a liberação destas enzimas do periplasma bacteriano e que a eliminação da etapa de centrifugação não alterou os resultados. Todos os poços que não apresentavam imipenem se mantiveram inalterados após adição dos extratos, garantindo a especificidade do teste. O teste modificado foi adicionalmente capaz de detectar a produção de GES-5, diferente do observado pelos autores do teste original. Conclusão: Os resultados obtidos por este estudo mostram que o teste modificado é bastante efetivo, podendo, ainda, ser mais sensível que o original. Embora a modificação aqui proposta envolva a aquisição de um equipamento e mais uma etapa de processamento, seu custo inicial é rapidamente compensado pela capacidade de processar muitas amostras. Além disso, a necessidade da centrifugação foi abolida. Por fim, o teste modificado pode representar uma ferramenta valiosa também para laboratórios de pesquisa interessados em investigar BPCs.