Resumo

A inibição da β-glicosidase pelo seu produto, a glicose, é um dos processos que impossibilita uma maior eficiência durante a conversão da biomassa lignocelulósica em açúcares fermentescíveis. No presente trabalho o fungo termofílico Myceliophthora thermophila M.7.7 foi cultivado em fermentação em estado sólido (FES), usando como fonte de carbono misturas (w/w 1:1) de bagaço de cana e farelo de trigo, além de fontes de nutrientes minerais, o extrato enzimático bruto obtido foi submetido ao processo de liofilização para concentração da amostra, resultando na atividade enzimática 72 U/ml. As β-glicosidase presentes no preparado enzimático foram separadas por cromatografia em gel de Sephacryl S-200 pelo equipamento AKTA purifier em coluna XK 16. Para evidenciar a separação das duas enzimas foi realizado um zimograma em gel de policrilamida sem SDS, utilizando esculina como substrato e cloreto férrico para a coloração. A partir da separação das enzimas a caracterização dos parâmetros cinéticos foi estabelecida para a β-glicosidase de 50kDa, os ensaios enzimáticos foram realizados variando a concentração do substrato (pNPG - 0,2 a 10mM) e na ausência e presença de glicose (4mM), a reação ocorreu em 10 minutos com temperatura de 60°C. Os valores para Vmáx e Km foram obtidos através dos gráficos de Michaelis Menten, onde os valores para a reação sem inibidor foram, respectivamente, de 1,41μmol/min/mg e 0,68mM e com inibidor, de 1,20μmol/min/mg e 0,68mM. A partir desses dados foi possível obter constante de inibição Ki=23mM. O resultado foi satisfatório, pois foi possível identificar uma β-glicosidase ativa mesmo na presença de glicose, característica essencial para maior eficiência da sacarificação do material lignocelulósico, encorajando estudos subsequentes utilizando esse fungo.