Resumo

Introdução: A tuberculose (TB) humana é uma doença infecciosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A vacina BCG (bacille Calmette-Guerin) é a única autorizada para prevenção contra TB, sendo a BCG Moreau a cepa utilizada no Brasil. Todavia, estudos comprovam que a proteção conferida por esta é relativamente de baixa eficácia e não fornece proteção adequada contra a doença em adultos. A proteína de fusão recombinante CMX, desenvolvida pelo nosso grupo a partir de fragmentos peptídicos imunodominantes de antígenos do Mtb (Ag85C_MPT51_HspX), se mostrou antigênica e imunogênica em camundongos e humanos, portanto promissora para ser usada como vacina. O objetivo deste trabalho foi construir uma vacina BCG recombinante expressando a proteína de fusão CMX. Material e Métodos: Mycobacterium bovis BCG-Moreau competentes foram transformadas por eletroporação, utilizando os DNA plasmídiais contendo a sequência codificadora para a proteína CMX. Para tanto utilizou-se três plasmídios bifuncionais para E. coli/micobactérias: pLA71-CMX, pLA73-CMX e PMIP12-CMX, que permitem a expressão da proteína recombinante com apenas o peptídeo sinal da β-lactamase, com a proteína β-lactamase inteira ou a expressão intracelular, respectivamente. Os clones transformados foram selecionados em meio 7H9 contendo piruvato, OADC (10%) e canamicina, com incubação a 37ºC em estufa contendo 5% de CO2. A presença dos plasmídeos recombinantes em BCG foi confirmada por PCR. A expressão da proteína de fusão foi avaliada pela técnica Western blot. Resultados e Discussão: Os clones de BCG Moreau transformantes apresentaram um crescimento lento de aproximadamente 50 dias. Ao término do crescimento, as culturas foram avaliadas por PCR para verificar a presença dos plasmídios recombinantes e todos apresentaram o gene de fusão recombinante correspondente a aproximadamente 600 pares de bases. Quando avaliada a expressão da CMX por western blotting, apenas os clones contendo o plasmídeo pLA71-CMX apresentou banda em torno de 30 KDa, característica da proteína de fusão. Os transformantes envolvendo os plasmídeos pLA73-CMX e PMIP12-CMX não expressaram a proteína de fusão recombinante talvez devido a falha na transcrição do RNA mensageiro, ou então em uma fase posterior, hipóteses estas que precisam ser melhor analisadas. Conclusão: Uma vacina BCG Moreau recombinante expressando a proteína de fusão CMX foi obtida. O plasmídio pLA71 recombinante foi o único que permitiu a expressão da CMX. Financiamentos: FAPEG, CNPq