Resumo

Enzimas degradativas de hidrocarbonetos com atividades hidrolíticas e oxidativas são importantes, pois podem ser utilizadas em biocatálises industriais e em diversos processos ambientais, como o tratamento de efluentes contaminados com resíduos oleosos industriais. Enzimas degradativas de origem microbiana apresentam vantagens em reação às demais, como alta versatilidade, estabilidade, facilidade de manipulação genética e menor custo de produção em larga escala. Essas enzimas são comumente produzidas por micro-organismos isolados de efluentes óleos, devido à pressão seletiva imposta pela presença de hidrocarbonetos nesse ambiente. Bactérias com potencial de produção de enzimas hidrolíticas e oxidativas foram isoladas de efluentes oleosos de uma lagoa aerada facultativa de uma estação de tratamento de efluentes industriais (ETEI), de origem petroquímica. Foi obtido um total de 112 isolados, dos quais 70 foram avaliados quanto à produção de enzimas esterases, lipases, epoxido hidrolases e Bayer-Villager monooxigenases por apresentaram bom crescimento em meio mineral suplementado com hidrocarbonetos. Para a detecção dessas enzimas foi utilizada a técnica de triagem enzimática de alto desempenho (HTS) em microplacas, com a utilização de sondas fluorogênicas, que emitem fluorescência na presença das enzimas. Para esse processo eram colocados nos poço das microplacas uma solução de 1,1mL contendo 0,1mL de células à 0,2 mg mL¯¹, 0,001mL das sondas específicas para a detecção de cada enzima, 0,08mL de BSA e 0,01mL de periodato de sódio. A fluorescência foi medida em espectofotômetro de fluorescência a 460 nm a cada 24 horas por 3 dias. Foi possível detectar a presença de atividade de esterases, lipases, epóxido hidrolases terminais, epóxido hidrolases não terminais e Bayer-Villager monooxigenases dos grupos 1 e 3 em 5, 16, 6, 7, 5 e 12 isolados respectivamente. Os maiores valores de conversão enzimática, de 74% e 50%, foram obtidos para a sonda de detecção de lipases por isolados identificados como Stenotrophomonas sp. e S. maltophilia respectivamente. Os resultados indicam que foi possível isolar micro-organismos capazes de produzir enzimas degradativas, com potencial de utilização industrial e ambiental.