Resumo

Novas estratégias independentes de cultivo têm sido utilizadas nas últimas décadas para a análise de comunidades microbianas; estas estratégias podem ser utilizadas para a triagem e bioprospecção de genes com potencial biotecnológico. As limitações das técnicas de cultivo no laboratório podem ser superadas com o uso de ferramentas de screening molecular e sequenciamento de genes alvo. Estudos anteriores sugerem que o solo de Mata Atlântica abriga microrganismos que possuem genes envolvidos na biossíntese de importantes produtos naturais, como os policétideos (PKS). Torna-se fundamental a caracterização dos sistemas envolvidos na biossíntese destas moléculas com potencial farmacológico. Foi construída uma biblioteca metagenômica de solo de Mata Atlântica que conta com cerca de 5000 clones construída com Escherichia coli DH10B com vector pBAC/oriV com insertos entre 40 e 50 Kb. Os clones foram cultivados em meio líquido a 37º por 18 horas para a extração do vetor. Devido ao tamanho do inserto foram testados diferentes kits e metodologias para a extração de vetores. Para o triagem dos genes de produção de policétideos, foi feita a padronização por técnica de PCR para genes dos sistemas biossintéticos PKS I e II. Os clones positivos foram isolados e sequenciados. Para facilitar o screening foram feitos grupos de 96 clones, as placas que contem os clones positivos foram divididas em 3 grupos (pool’s) de 32 clones, os grupos positivos foram selecionados para extração individual de cada clone. Inicialmente foram detectados 12 grupos positivos para PKS I e 20 grupos para PKS II. Apos da seleção dos grupos foram sequenciados clones de 4 grupos dos sistemas de genes codificadores de policetídeos de tipo I e II, sugerindo que ainda há uma considerável diversidade de genes a ser explorada.