Resumo

Gluconacetobacter diazotrophicus é uma bactéria endofítica, que foi primeiramente encontrada colonizando os tecidos de cana-de-açúcar. Estudos têm mostrado seu papel como promotora do crescimento vegetal em diferentes espécies, por fixar nitrogênio atmosférico, solubilizar nutrientes minerais, produzir fitormônios e atuar no controle biológico de patógenos. Além disso, esse micro-organismo é capaz de sobreviver sob diversos estresses ambientais, destacando-se sua tolerância a elevadas concentrações de soluto. G. diazotrophicus pode crescer em meio de cultivo com até 30% de sacarose. Algumas rizobactérias apresentam vias de biossíntese de lipopolissacarídeos com papel importante na osmoadaptação. No entanto, muito pouco é conhecido o papel dessas vias para a osmotolerância em G. diazotrophicus. O presente trabalho teve como objetivo avaliar se a biossíntese de lipopolissacarídeos está envolvida na tolerância ao estresse osmótico em G. diazotrophicus PAl 5 Para isso, uma biblioteca de 2227 mutantes de inserção por transposon Tn5 foi cultivada em meio LGIm suplementado com os agentes estressantes sacarose (0,6 M), NaCl (0,1 M) ou Na2SO4 (0,2 M). O DNA genômico dos mutantes sensíveis aos agentes estressantes foi isolado e posteriormente digerido com EcoRI. As regiões flanqueadoras do transposon foram recuperadas por auto-ligação do produto da digestão, seguido de transformação em células competentes de Escherichia coli (pir-). Após o sequenciamento do DNA plasmidial, foi possível identificar um mutante para o gene gumJ, que é responsável por codificar uma proteína de biossíntese de lipopolissacarídeos. Este gene está organizado no mesmo operon de gumD, responsável pela produção de exopolissacarídeos em G. diazotrophicus. GumD tem sido descrita como envolvida na resposta a estresses abióticos nesta bactéria, observando-se ainda seu papel na interação com a planta hospedeira. Nossos resultados corroboram a literatura e revelam que GumJ é essencial para a osmotolerância em G. diazotrophicus, sugerindo que esta proteína também possa desempenhar papel importante em resposta a outros estresses abióticos e na interação da bactéria com a planta. Além disso, a identificação de mais um gene do operon gum colabora para a elucidação da via de biossíntese de exopolissacarídeos nesta bactéria.