Resumo

INTRODUÇÂO: Micobacteriófagos são fagos que infectam o gênero Mycobacterium ssp. Grandes avanços têm sido obtidos nos estudos destes organismos, graças, principalmente, à tecnologia de sequenciamento de nova geração. O atual trabalho traz os primeiros micobacteriófagos isolados e sequenciados no Brasil: Zoo2 e Zoo28-2, isolados de material de compostagem da Fundação Parque Zoológico de São Paulo (FPZSP). MATERIAIS E MÉTODOS: Material de compostagem foi coletado, diluído em tampão de fago (1:1 v/v), filtrado em membrana 0,22 µm e utilizado para a infecção de Mycobacterium smegmatis mc²155. A infecção foi realizada utilizando o método padrão “overlay” com top ágar 0,35%. Placas de lise individuais foram coletadas e purificadas por sucessivos rounds de infecção. Os fagos foram multiplicados e, em seguida, ultrapurificados por gradiente de CsCl. Após diálise, o material genético foi obtido por extração por fenol/clorofórmio e, então, sequenciado no equipamento 454 GS FLX da Roche. Os reads obtidos foram montados e, em seguida, os contigs, anotados utilizando o software DNAMaster. Todos os procedimentos realizados foram acompanhados por experimentos controle utilizando o fago D29. RESULTADOS: O fago Zoo2 tem 69.377 pb e 80 ORFs identificadas, além de 1 tRNA; entre as 80 ORFs identificadas, apenas 7 tiveram a suas funções preditas. Zoo2 apresenta 99% de similaridade com o fago Patience, um singleton isolado em 2009 na África do Sul. Patience possui 70.506 pb, conteúdo GC de 50,3% e extremidade circularmente permutável. O fago Zoo28-2 tem 58.671 pb e 113 ORFs identificadas, das quais 26 tiveram suas funções preditas. O fago Zoo28-2 possui 66% de similaridade com o fago DotProduct, um membro do cluster F e do subcluster F1 isolado em 2009 na costa oeste dos EUA. Dotproduct possui 55.363 pb, conteúdo GC de 61,8% e extremidades coesivas. DISCUSSÃO: Este trabalho apresenta o genoma dos primeiros micobacteriófagos isolados nos Brasil. Zoo 28-2 é um novo membro do cluster F, apresentando apenas 23% de seus genes com funções previsíveis. Já no caso do fago Zoo-2, a grande similaridade entre este fago e o fago Patience não permite definir se trata-se de um fago Patience-like ou de um re-isolamento do mesmo, evento este ainda não observado entre os mais de 500 micobacteriófagos sequenciados.