Resumo

Membro da família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, gênero varicellovirus, herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV1) tem sido associado a diferentes condições clínicas em bovinos (doenças respiratórias e genitais/reprodutivas). Não existe um procedimento padrão para medidas de controle e profilaxia das infecções causadas por herpesvírus. É comum a utilização de vacinas para prevenção da manifestação de sinais clínicos por meio da indução da produção de anticorpos pelo animal. As vacinas tradicionais são incompatíveis com programas de erradicação, pois não permitem a diferenciação entre animais infectados (portadores) e animais vacinados. Uma abordagem alternativa para seleção de novos antígenos vacinais ou para diagnóstico é a seleção de mimetopos recombinantes por meio da sua interação com anticorpos específicos. Sendo assim o presente estudo concentrou-se em identificar, dentro de uma biblioteca apresentada em fagos, peptídeos miméticos com alta reatividade a anticorpos específicos para o BoHV1. Foi realizado um experimento de seleção biológica utilizando uma biblioteca de peptídeos randômicos e lineares composta de 12 resíduos de aminoácidos fusionada à proteína III de fagos M13, contra IgGs específicas para o BoHV1, purificadas em coluna de cromatografia por afinidade, a partir de bovinos soropositivos. Foram realizados três ciclos de seleção e amplificação para o enriquecimento dos alvos ligantes às proteínas totais de BoHV1. A reatividade do “pool” de clones selecionados foi confirmada por ELISA, demonstrando a eficiência da seleção a partir dos anticorpos específicos. Um total de 44 clones do terceiro ciclo foi isolado e as sequências de aminoácidos dos peptídeos foram determinadas pelo sequenciamento. Para a avaliação da especificidade individual, realizou-se o ELISA dos clones mais frequentes evidenciados no sequenciamento, tendo como controle o fago sem inserto (selvagem). Para todos os clones testados, foi calculado o índice ELISA (IE) e os valores comparados ao soro dos animais comprovadamente negativos previamente selecionados utilizando o teste ELISA padrão (Kit comercial). As amostras de IE maior que 1(um) foram consideradas positivas para BoHV. Três peptídeos foram identificados e os resultados dos imunoensaios revelam seu potencial para o diagnóstico do BoHV1. Os peptídeos poderão ainda ser testados como antígenos candidatos a formulação de vacinas recombinantes, contribuindo para o controle do herpesvírus bovino.