Resumo

Las proteasas representan uno de los principales grupos de enzimas de aplicación industrial, siendo responsables de aproximadamente el 60% de las ventas mundiales de enzimas. La principal fuente de obtención de proteasas son los microorganismos, debido a las ventajas técnicas y económicas que estos ofrecen, destacándose entre los mismos a los psicrófilos, los cuales producen enzimas estables frente a bajas temperaturas, y a diversas condiciones tales como presencia de oxidantes y detergentes. Ensayos previos realizados por el Laboratorio de Fermentaciones del departamento de Biotecnologia de Lorena (EEL-USP) identificaron, dentro de un grupo de microorganismos aislados del continente Antártico, a Rhodoturola mucilaginosa L7 (aislada de algas marinas), como una levadura psicrótrofa productora de proteasas. En este trabajo, se procedió a analizar el crecimiento de dicha levadura y la producción de proteasas para su posterior purificación. En primer lugar se llevó a cabo una curva de crecimiento, utilizando frascos de erlenmeyers de 250 ml, con 50 ml de medio de cultivo Saboraud dextrosa, inoculadas con 10⁶ UFC/ml. La temperatura de crecimiento utilizada fue de 25ºC durante 96 h, con una agitación de 150 rpm. Las muestras fueron colectadas a intervalos de 24 h. Se observó un crecimiento exponencial en las primeras 48 h (10⁹ UFC/ml), etapa en la cual además se observó la mayor actividad proteasa (28,32 ± 0,60 U/ml), utilizando el método de Azocaseína (0,5 % p/v a pH 5,2). Paralelamente, se observó un descenso continuo en el pH del medio en función del tiempo, como así también en la concentración de proteínas, las cuales fueron cuantificadas por el método del ácido Bicinconínico. Por lo tanto, el crecimiento de la levadura en estas condiciones (48 h a 25ºC) será utilizado para la obtención de proteasas para su posterior purificación mediante sistemas de dos fases acuosas (PEG/NaPA). Agradecimientos: FAPESP, CAPES y CNPq.