Resumo

O número de espécies de Candida envolvidas em infecções fúngicas tem crescido nas últimas décadas. A candidíase orofaríngea e a candidíase sistêmica são geralmente precedidos à prévia colonização da cavidade oral. A principal espécie é a Candida albicans. No entanto, espécies chamadas C. não-albicans estão cada vez mais frequentes. Na rotina a identificação é feita por análise morfológica e testes bioquímicos. Mas, por técnicas moleculares várias espécies crípticas foram detectadas no gênero Candida. O objetivo do estudo foi identificar espécies crípticas entre cepas de Candida parapsilosis provenientes da cavidade bucal de crianças e adultos residentes em Manaus/AM. Para isso, foi realizado PCR/RFLP utilizando primers S1F e S1R para amplificação do gene SADH nas seguintes condições de termociclagem: uma desnaturação inicial por 7 min a 94ºC, seguida de 30 ciclos de 1 min a 94ºC, 1 min a 50ºC de anelamento de primers e 1 min a 72ºC para extensão, com extensão final de 10 min a 72ºC. A eletroforese em gel de agarose (2%) foi feita com um marcador de 100 pb e tampão Tris-Borato – EDTA (TBE) a 150 volts durante 1h. Os produtos de PCR obtidos de C. parapsilosis foram digeridos com enzima de restrição BanI num volume de reação de 30uL (25 uL do produto da PCR, 3 uL de 10x tampão e 2 uL de BanI). Após a digestão foi realizada eletroforese em gel de agarose (2%) com marcador de 100 pb. Tampão TBE foi utilizado na corrida a 150 volts. Os produtos da PCR e da digestão enzimática foram corados com SYBRGreen e visualizados por transiluminação UV. C. parapsilosis ATCC 22019, C. orthopsilosis ATCC 96139 e C. metapsilosis ATCC 96144 foram utilizados como controle. Das 16 cepas que foram submetidas a PCR, 14 amostras apresentaram um produto amplificado de 716 pb indicando ser do grupo C. parapsilosis. Posteriormente as 14 amostras foram submetidas à digestão enzimática (PCR/RFLP) para identificação de espécies crípticas, possibilitando a determinação de 10 cepas (71,43%) como C. parapsilosis sensu stricto, 3 cepas (21,43%) como C. orthopsilosis e 1 cepa (7,14%) como C. metapsilosis. As espécies identificadas neste estudo não haviam sido citadas para o estado do Amazonas, desta forma este estudo contribui para o conhecimento epidemiológico das espécies de Candida em Manaus. Fomento: FAPEAM e FIOCRUZ