Resumo

Os métodos de identificação de leveduras baseados em caracterização fenotípica e bioquímica apresentam algumas deficiências, já que alguns grupos de leveduras possuem poucas variações morfológicas. Novas opções de identificação desses micro-organismos como a utilização de métodos moleculares, têm sido descritas para superar as limitações dos métodos de identificação tradicionais. O objetivo deste trabalho foi caracterizar isolados clínicos de Candida através da técnica de AP-PCR. Foram estudadas 82 leveduras do gênero Candida, 73 isolados clínicos e 9 cepas padrão de referência da “American Type Culture Collection”. DNA genômico foi extraído e amplificado com iniciador arbitrário AP-4. Os padrões de amplificação foram analisados através de eletroforese em gel de agarose e com auxílio do programa Gel Compar II versão 2.5. A técnica de AP-PCR com o iniciador AP-4 possibilitou a distinção das nove espécies de cepas padrão ATCC de Candida (C. albicans, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. lusitaniae, C. famata) onde todas as espécies apresentaram perfis de amplificação com número, intensidade e tamanho de banda específico. Foi confirmada a identificação dos isolados clínicos de C. parapsilosis (28) e C. tropicalis (19), contudo não foram produzidos perfis de amplificação com alta especificidade para C. albicans e C. dubliniensis, e com isso, 14 dos 24 isolados de C. albicans foram alocados no mesmo grupo que a cepa padrão ATCC C. dubliniensis. Já o isolado de C. guilliermondii, foi reclassificado como C. parapsilosis, pois apresentou alta similaridade com a cepa ATCC. Os isolados de C. parapsilosis apresentaram uma variação intraespécie com a formação de dois perfis de amplificação específicos que podem sugestionar a presença de espécies diferentes do complexo parapsilosis. Devido às limitações dos métodos clássicos para a identificação desses novos agentes de infecções fúngicas sistêmicas e à alta taxa de mortalidade associada a essas infecções, torna-se essencial o desenvolvimento de métodos específicos, sensíveis, rápidos e seguros. A identificação incorreta de leveduras demonstrou que os tradicionais testes bioquímicos, largamente utilizados para identificação das espécies, podem não demonstrar sensibilidade para pequenas diferenças entre os isolados de leveduras provenientes de candidemia hospitalar.