Resumo

Introdução: As peroxirredoxinas (Prxs) são peroxidases dependentes de tióis com atividade baseada em resíduos de cisteína que desempenham papel central na proteção contra o estresse oxidativo. Saccharomyces cerevisiae possui cinco Prxs localizadas em diferentes compartimentos celulares. Prx1p é uma proteína mitocondrial que parece atuar na redução do peróxido de hidrogênio gerado nessa organela. Devido à mitocôndria ser considerada a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ROS), Prx1p tem despertado muito interesse. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi caracterizar a localização de Prx1p nos diferentes sub-compartimentos da mitocôndria, a fim de determinar o seu envolvimento em diferentes processos que ocorrem nesses locais. Material e Métodos: A geração de anticorpos policlonais anti-Prx1p foi feita através de injeções subcutâneas da proteína Prx1p de S. cerevisiae em coelhos. Culturas de S. cerevisiae foram crescidas em meio contendo galactose como fonte de carbono. As mitocôndrias foram purificadas através do método de centrifugação diferencial seguido de seu fracionamento para a obtenção de frações representando os diferentes compartimentos mitocondriais. A localização de Prx1p foi avaliada através de eletroforese em gel de poliacrilamida em condição desnaturante (SDS-PAGE) seguido de western-blot. Resultados: O anticorpo anti-Prx1p reconheceu especificamente uma banda de ~24KDa, representando a proteína Prx1p madura, direcionada para a mitocôndria. A obtenção de frações representando os diferentes compartimentos mitocondriais se deu maneira eficiente, conforme verificado por análises de western-blot utilizando proteínas específicas para cada compartimento. Utilizando esta abordagem, demonstramos que Prx1p apresentou um padrão de localização semelhante à proteína de matriz mitocondrial α-cetoglutarato desidrogenase. Conclusão: A peroxirredoxina Prx1p de S. cerevsiae localiza-se predominantemente na matriz mitocondrial. No momento, estamos caracterizando a localização de tiorredoxina e tiorredoxina redutase nos sub-compartimentos mitocondriais. Também estamos interessados em compreender os mecanismos pelos quais estas proteínas são translocadas do citosol para os diferentes sub-compartimentos mitocondriais.