Resumo

Durante a defesa imunológica do hospedeiro mamífero contra patógenos observa-se a produção de diferentes classes de peptídeos antimicrobianos (AMPs) endógenos, moléculas do sistema imune inato que podem ser multifuncionais, apresentando tanto atividade microbicida quanto imunumodulatória. Esses peptídeos são evolutivamente conservados em diversos grupos de seres vivos, como plantas e animais, invertebrados e vertebrados. Em invertebrados, a expressão de AMPs tem sido descrita em diversos tecidos, e no caso de artrópodes peçonhentos, nas glândulas de peçonha, desempenhando papel importante na resposta imune inata desses animais. Dessa forma, este trabalho visa identificar AMPs da peçonha de escorpião com potencial atividade fungicida contra Cryptococcus neoformans, um importante patógeno humano causador de 1 milhão de casos de meningoencefalite por ano em pacientes com AIDS, levando a aproximadamente 625 mil mortes por ano. Os peptídeos usados foram sintetizados quimicamente a partir de sequências obtidas de bibliotecas de cDNA de glândula de peçonha de escorpiões do Cerrado Brasileiro. Células das linhagens H99 e B3501 de C. neoformans foram cultivados em meio RPMI-1640, segundo o protocolo M27-A da CLSI, na ausência ou presença de diferentes concentrações de onze peptídeos. Como controle positivo foi utilizado anfotericina B. Após 48 horas de incubação, a avaliação do crescimento do fungo foi obtida por densitometria optica utilizando espectrofotômetro com leitor de placa com leitura em 630nm. O MIC₅₀ e MIC₉₀ foram calculados por meio de regressão não linear usando-se o software GraphPad Prism versão 5.00. Os onze peptídeos identificados e sintetizados apresentam similaridades estruturais com outros peptídeos antimicrobianos isolados anteriormente de escorpiões e anfíbios. Sete dos onze peptídeos apresentaram uma atividade antifúngica dependente de dose. O MIC₅₀ dos peptídeos para C. neoformans H99 variou de 4,4 μM a 75,2 μM, no entanto, nenhum peptídeo foi mais potente que a Anfotericina B, usado como controle. Além disso, as concentrações inibitórias para C. neoformans B3501 foram menores em comparado à linhagem H99. Esses resultados representam o primeiro passo na perspectiva de busca de novos fármacos mais eficazes para o combate à crescente proliferação de linhagens de patógenos multiresistentes e com menor toxicidade aos pacientes.