Resumo

Uma importante característica atribuída à patogenicidade dos Staphylococcus aureus é sua capacidade de formar biofilme sobre dispositivos médicos implantáveis. Até o momento, dois tipos de biofilmes foram descritos para S. aureus, o associado ao polissacarídeo PIA/PNAG e o biofilme PIA/PNAG-independente. Este último apresenta, principalmente, matriz protéica. Algumas proteínas de superfície como a proteína A (Spa), proteínas que se ligam à fibronectina FnBPA e FnBPB, proteína de superfície dos estafilococos SasG e, mais recentemente, a proteína de ligação à penicilina PBP2a, dentre outras, têm sido associadas à formação/acúmulo de biolfilme. No entanto, estes trabalhos são ainda incipientes, na medida em que poucas amostras foram analisadas. Desta forma, realizamos um estudo visando-se correlacionar a quantidade de biofilme acumulada por S. aureus resistentes à meticilina (MRSA), pertencentes a importantes complexos clonais de MLST (CC1, CC5, CC8, CC30), com a expressão de genes que codificam para proteínas de superfícies comumente associadas ao biofilme (fnbA, fnbB, sasC, sasG, spaA). Além disso, como o regulador transcricional SarA tem sido apontado como importante regulador positivo do biofilme, a expressão de sarA também foi analisada. Para esses estudos foram escolhidas 10 amostras de cada CC. O biofilme foi formado em placas de microtitulação e sua acumulação determinada através do método espectrofotométrico. O biofilme dessas amostras (BU=1.56±1.48) foi removido completamente com proteinase K (BU=0.046±0.036), confirmamos sua natureza PIA/PNAG--independente (p<0.005). Os estudos de expressão gênica foram realizados através de RT-qPCR, utilizando o kit master mix SYBR Green. A plataforma utilizada foi o Step One Real Time PCR System (Applied Biosystem). O teste da correlação de Pearson (R=0,79) evidenciou forte correlação positiva entre o acúmulo do biofilme dessas amostras e o número de transcritos de fnbA. Uma correlação positiva, porém moderada (R=0,58), pode ser observada em relação à expressão de fnbB. Entretando, o valor de R para expressão do mecA foi de –0,06, o que não nos permitiu estabelecer uma relação clara entre biofilme e a expressão de tal gene. Finalmente, uma correlação positiva fraca (R= 0,25) foi observada entre o biofilme acumulado e a expressão de sarA. Nossos dados confirmam a importância de fnbAB no maior acúmulo de biofilme em amostras clínicas de MRSA pertencentes a diferentes complexos clonais.