Resumo

Introdução: O vírus herpes simples (HSV) e vírus varicela-zoster (VZV) pertencem à família Herpesviridae. Esses vírus são responsáveis por uma variedade de enfermidades nos seres humanos, incluindo doenças no sistema nervoso central, meningites, infecções de pele e mucosas, encefalites e conjuntivites. As manifestações clínicas ocorrem principalmente nos pacientes imunocomprometidos, podendo se apresentar em episódios frequentes, incluindo doenças graves e infecções disseminadas decorrentes da reativação. Para o diagnóstico laboratorial das meningites causadas por HSV ou VZV, o exame do líquido cefalorraquidiano (LCR) é fundamental. O uso de técnicas moleculares como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de LCR tem revolucionado o diagnóstico de várias doenças infecciosas, permitindo a detecção de DNA com alta sensibilidade e especificidade. Objetivo: Este estudo teve como objetivo determinar o limite mínimo de detecção da técnica Nested-PCR in house para os vírus HSV e VZV. Método: Nove diluições seriadas dos controles quantificados (1000, 500, 250, 100, 75, 50, 10, 5 e 1 cópia/µL) de vírus purificado de cada patógeno foram submetidas à técnica de Nested-PCR. Os primers externos e internos específicos utilizados na PCR originaram fragmentos de 280 pb para HSV e 208 pb para VZV. Para a visualização dos resultados das reações (produto de DNA amplificado), foi utilizada a técnica de eletroforese em gel de agarose. Foi considerado o limite mínimo de detecção para cada reação a maior diluição que apresentava uma banda de DNA visível no gel de agarose correspondente ao peso molecular do fragmento amplificado. Resultados: Determinou-se que o limite mínimo de detecção para HSV e VZV foi respectivamente de 5 e 10 cópias/µL. Conclusão: A reação de Nested-PCR para HSV e VZV apresentou limite mínimo de detecção menor que os resultados verificados em outros estudos, demonstrando a alta sensibilidade da reação.