Resumo

INTRODUÇÃO O Complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) é formado por um grupo de espécies causadoras de tuberculose. Nesse grupo está incluso M. bovis, agente causador da tuberculose bovina (TB), uma zoonose que pode ocasionar impactos econômicos e risco iminente à saúde humana. Atualmente o diagnóstico da TB é realizado por testes demorados. Visando um teste específico e rápido, a técnica de nanopartícula de ouro (AuNP) vem se mostrando eficiente, permitindo reduzir o tempo e custo de analise, aliada a praticidade de execução. O presente estudo objetivou desenvolver a técnica de AuNP para identificação de CMT a partir de colônias isoladas. METODOLOGIA Esta técnica consiste na utilização de AuNP, associadas a primers específicos para CMT que se ligam com o DNA da bactéria em questão permitindo um diagnóstico visual baseado em propriedades colorimétricas das partículas. DNA de cepas de referência de M. bovis, M. bovis BCG, M. fortuitum, M. gordonae, M. smegmatis, M. vaccae, M. avium, M. intracellulare, Brucella canis, Salmonella spp. foram utilizadas. As AuNP foram sintetizadas pelo método de redução de citrato. Primers obtidos a partir de regiões do gene gyrB, foram utilizadas para hibridização e detecção especifica, associados a AuNP para posterior leitura visual e em espectrofotômetro de absorção. RESULTADOS E DISCUSSÃO Para as condições testadas, a técnica de AuNP obteve uma sensibilidade e especificidade de 100%, detectando apenas os membros de CMT (M. bovis e M. bovis BCG). A técnica de AuNP além de sensível é muito eficiente, pois permite identificar amostras positivas de forma visual, devido a alteração colorimétrica que ocorre na reação. Em amostras negativas a coloração é vermelha, pois os primers utilizados ficam livres na reação e interagem com as AuNPs, protegendo as mesmas contra os sais da reação, não havendo alteração de cor. Já em amostras positivas os primers se anelam ao DNA, deixando as AuNPs desprotegidas contra os sais, ocorrendo assim uma reação química e alteração da cor vermelha para azul. Outra forma de identificação é através do espectrofotômetro de absorção, onde amostras positivas apresentam picos em 720nm e negativas em 520nm. CONCLUSÃO Foi possível desenvolver o ensaio de AuNP para identificar CMT, de maneira precisa, barata e em apenas 20 minutos de trabalho após a extração de DNA. Devido à facilidade da execução da técnica, ela se mostrou muito promissora para ser possivelmente utilizada na identificação de BAAR clínicos isolados.