Resumo

Introdução: O desenvolvimento de proteínas de fusão se vale da estratégia de utilizar apenas as subunidades mais imunogênicas dos antígenos e fusiona-los, no entanto essa estratégia não possui regras definidas, pois a aproximação artificial de peptídeos pertencentes a diferentes proteínas acarretam em novas interações intra e intermoleculares, cujos resultados não podem ser totalmente previstos. Nesse sentido, o objetivo desse trabalho foi expressar uma proteína de fusão (CDα), constituída de subunidade de antígenos do Mycobacterium tuberculosis (Ag85c, MPT51 e HspX), purificá-la, avaliar sua constituição e comparar sua imunogenicidade em camundongos com outra proteína de fusão construída anteriormente no nosso laboratório (CMX). Material e Métodos: Para expressão da proteína o plasmídeo pET23a/CDα foi transformado por eletroporação em E. coli (BL21/pLysS). A purificação foi feita em condições desnaturantes em coluna de afinidade de níquel. A constituição da proteína recombinante foi avaliada por espectrometria de massa MALDI-TOF após digestão com tripsina 0,05 μg/µL. Para avaliação da imunogenicidade 2 grupos de 4 camundongos BALB/c foram imunizados 20μg de CDα e CMX (3 vezes). Na primeira imunização foi utilizado adjuvante completo de Freud e nas posteriores adjuvante incompleto de Freud. Após 15 dias da última imunização, o sangue dos camundongos foi coletado para dosagem de IgG2a por ELISA. Discussão dos Resultados: A expressão da proteína recombinante em E. coli rendeu uma purificação de 4,8 mg/ml de proteína. A análise por MALDI-TOF confirmou 68% da constituição da proteína recombinante, incluindo as sequencias que interligam cada subunidade. A proteína recombinante de fusão CDα induziu resposta imune humoral específica, porém em níveis inferiores aos induzidos pela proteína CMX recombinante. O desenho de proteínas e a identificação de sequências podem ser sutis e complexas e não há modelo experimental competente o suficiente para identificar todas as propriedades funcionais e estruturais de uma proteína sintética. Conclusão: A proteína CDα não apresentou alteração na sua constituição confirmadas pelo MALDI-TOF e foi imunogênica em camundongos.