Resumo

INTRODUÇÃO: A quantificação do bacilo realizada pelo exame baciloscópico e histopatológico apresenta sensibilidade limitada. Portanto, o emprego de uso de técnicas moleculares permite o diagnóstico direto do material clínico com elevada especificidade e sensibilidade. A PCR em tempo real (qPCR) é um ensaio sensível e específico que permite a quantificação do número de bacilos a partir de diversas amostras, além de poder ser utilizada no diagnóstico diferencial de muitos patógenos. Pacientes multibacilares (MB) hansenianos liberam o bacilo Mycobacterium leprae através da secreção nasal, sendo a coleta deste realizada por procedimento não invasivo. Até o momento, nenhum estudo avaliou a sensibilidade e especificidade da qPCR para o diagnóstico da hanseníase utilizando amostras de secreção nasal. O presente estudo tem como objetivo quantificar o DNA de M. leprae por qPCR em amostras de secreção nasal de pacientes com hanseníase, correlacionando com a classificação de Ridley-Jopling e índice baciloscópico. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram analisadas amostras de muco nasal de 54 casos, 39 MB e 15 paucibacilares (PB), confirmados de hanseníase atendidos no Centro de Referência Nacional em Dermatologia Sanitária Dona Libânia. Todas as amostras foram submetidas à extração de DNA, seguida de amplificação de um fragmento específico da região 16S rRNA do genoma de M. leprae pela qPCR, cuja especificidade foi verificada através da curva de dissociação (Tm=79,5ºC) e não amplificação de outros microorganismos. DISCUSSÃO DOS RESULTADOS: O método foi suficientemente sensível para detectar 20 fg de DNA de M. leprae, o equivalente a quatro bacilos. Na análise da secreção nasal o ensaio foi capaz de confirmar o diagnóstico em 89,7% dos casos MB e 73,33% dos casos PB. O número de bacilos detectados nas amostras de secreção nasal de casos variou de 1,39 x 103 bacilos em PB a 8,02 x 105 bacilos em MB. CONCLUSÃO: A qPCR se mostrou sensível e útil para o diagnóstico de M. leprae em secreções nasais de pacientes MB e PB.