Resumo

H. influenzae (Hi) é um microrganismo comensal que pode estar presente na nasofaringe (NF) humana podendo causar doença em indivíduos suscetíveis. A vacina conjugada polissacarídeo-proteína além proporcionar uma proteção direta contra a doença aos vacinados, também reduz a colonização na NF pelas cepas vacinais. A investigação da taxa de portador na população é frequentemente utilizada para avaliar o impacto vacinal. Metodologias clássicas como a cultura são muito trabalhosas e demandam um tempo maior para a total identificação do microrganismo, portanto, técnicas moleculares de alta sensibilidade e especificidade como a PCR-TR têm sido avaliada para esta finalidade. Diferentes ensaios moleculares têm sido desenvolvidos para diferenciar Hi de outras espécies comensais utilizando vários genes alvos específicos como o gene hpd, responsável por codificar a proteína D de Hi e que está presente tanto nos Hi capsulados e não capsulados permitindo a detecção das duas variantes. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica da PCR-TR, utilizando o gene hpd, para detectar Hi na secreção de NF de crianças saudáveis comparando com a cultura (gold-standard). Um total de 410 amostras de secreção de NF, estocadas a -70ºC em meio STGG foi utilizado para esta avaliação. Para todas as amostras foi feita a cultura bacteriana em ágar chocolate 10% com bacitracina e para as culturas positivas a identificação do Hi foi realizada por métodos fenotípicos (VX) e moleculares (PCR - ompP2, bexA e cap). Para as mesmas amostras foi feita a extração do DNA bacteriano a partir do STGG e realizada a PCR-TR para detecção do gene hpd. Entre as 410 amostras analisadas pela cultura, 166 (40%) apresentaram crescimento característico para gênero Haemophilus e foram identificadas como Hi e 244 (60%) apresentaram cultura negativa para Hi. Pela técnica da PCR-TR, 161 (39%) amostras foram positivas e 249 (61%) foram negativas para a detecção do gene hpd. Sendo assim, a PCR-TR apresentou uma sensibilidade de 90,9% (95%IC:85,3-94,7) e uma especificidade de 95,9% (95%IC:92,4-97,9) quando comparada à cultura para detectar Hi em amostras de NF. Portanto, de acordo com os resultados obtidos, podemos concluir que a utilização da PCR-TR tendo como gene alvo o hpd (proteína D) é uma ferramenta importante para detectar Hi e pode ser utilizada em estudos de portador para avaliação de impacto vacinal.