Resumo

A infecção por tipos específicos de Papilomavírus Humano (HPV), conhecidos como de alto risco ou carcinogênicos, são responsáveis por levar ao desenvolvimento do câncer cervical. Em 2008, 529.800 mulheres desenvolveram câncer do colo de útero no mundo, sendo que 275.100 vieram a óbito devido a esse. Apesar de HPV de alto-risco serem necessários para causar o câncer cervical e sua origem infecciosa ser bem reconhecida, tanto a resposta imune sistêmica como local contra esse vírus ainda não é bem entendida. A participação do sistema imune inato, particularmente pela ativação das vias de Toll Like Receptors (TLR), na resposta contra HPV e a relação dessas com progressão tumoral ainda necessita ser mais bem estudada. Já que fica cada vez mais evidente a importância dessas vias durante a infecção e tumorigênese causadas por HPV, existe a necessidade de se investigar principalmente os mecanismos moleculares envolvidos. Portanto, o objetivo desse projeto é estudar os efeitos da infecção por HPV nas vias de sinalização de TLR, focando principalmente nos papéis das oncoproteínas E6 e E7 tanto dos HPV de alto como dos de baixo risco. Para a realização do projeto utilizaram-se células tumorais derivadas de tumores causados por HPV, HeLa e SiHa, além de queratinócitos primários (PHK) transduzidos com vetores retrovirais contendo E6 e/ou E7 de HPV11, HPV16, HPV18 e HPV6b. A expressão de genes da via de TLR em células PHK transduzidas foram analisadas com o kit Toll-Like Receptor Signaling Pathway PCR Array da Qiagen, assim como a expressão em células derivadas de tumores. Diversos genes mostraram-se diferencialmente expressos quando comparados com os queratinócitos primários humanos normais, entre eles: regulados positivamente nas linhagens tumorais, CASP8, CCL2, CD14, CD180, ELK, FADD, HRAS, IFNA1, IL1A, IL6, IL8, IRAK1, IRAK2, JUN, MYD88, NFKBIL1, PTGS2, TLR1, TLR4, TLR6; regulados negativamente nas linhagens tumorais, HMGB1, IL12A, IRAK4, LY96, TLR10, TLR3, TLR8, TRAF6. Já em relação às células primárias transduzidas contendo somente E6 e E7 de HPV16 ou HPV11, os seguintes genes foram regulados negativamente na presença de E6 e E7 de HPV16: CLEC4E, IRF3, MAP2K4, MAP3K7, MAP4K4, MYD88, PELI1, PPARA, TICAM1, TLR8, TRAF6 e UBE2N; já na presença de E6 e E7 de HPV11, os seguintes foram regulados positivamente, CD80, CSF2, CSF3, ELK1, LTA e NFKBIL1. Finalmente, realizamos o estudo da expressão proteica de citocinas e quimiocinas envolvidas na via de sinalização de TLR e realizamos ensaios de ativação dos principais fatores de transcrição NFκB, JUN e ELK, importantes reguladores da via de TLR. Apoio: FAPESP 2008/03232-1 e 2011/14416-9