Resumo

Shigelose ou disenteria bacilar é uma doença altamente contagiosa, que tem como principal manifestação clínica a eliminação de fezes muco-sanguinolentas em pequeno volume, característica da diarreia de natureza inflamatória. As quatro espécies de Shigella, S. sonnei, S. flexneri, S. dysenteriae e S.boydii são agentes da doença, observando-se, no Brasil, amplo predomínio das duas primeiras. Diversas bactérias, inclusive Shigella, exibem a capacidade de produzir bacteriocinas, substâncias bioativas de caráter proteico que parecem conferir vantagem competitiva à amostra produtora. Bacteriocinas produzidas por membros da família Enterobacteriaceae são classificadas como colicinas ou microcinas, com base na massa molecular da substância, entre 80 e 25 kDa para colicinas e inferior a 10 kDa para microcinas. O objetivo deste estudo foi purificar uma substância antagonista produzida por uma amostra de S. sonnei isolada de espécime fecal de criança com doença diarreica aguda, atendida no Hospital Infantil João Paulo II, em Belo Horizonte/MG. A amostra produtora foi submetida a extração proteica pela adição lenta e constante de sulfato de amônio e o extrato intracelular precipitado à concentração de 75% do sal (C75) foi selecionado para as etapas posteriores do estudo. C75 foi dialisado e a substância antagonista presente no extrato foi purificada por meio de etapas sequenciais de cromatografia, empregando-se colunas de troca iônica Mono Q, gel filtração Superose 12 e fase reversa C18. Para avaliação da atividade antagonista de C75 e das frações recuperadas após cada etapa de cromatografia, utilizou-se o método de sobrecamada. Como reveladora, selecionou-se outra amostra de S. sonnei. A substância ativa purificada foi analisada em espectrometria de massa. Os dados obtidos demonstram que a substância antagonista produzida pela amostra em estudo possui carga líquida positiva ou neutra, caráter hidrofóbico e massa molecular de 7,2 kDa. Assim, os resultados indicam a identificação de uma microcina, classe de bacteriocina ainda não descrita para S. sonnei,. Palavras-chave: Shigella sonnei, bacteriocina, microcina, purificação de proteínas, cromatografia. Apoio financeiro: FAPEMIG, CNPq, CAPES, PRPq/UFMG e TWAS.