Resumo

Candida haemulonii, espécie emergente do gênero Candida, tem sido identificada como responsável por onicomicoses, paroníquias, candidíase vaginal e fungemias em seres humanos. Sabe-se que a produção de enzimas hidrolíticas, como peptidases, desempenha papel central em vários aspectos da patogenicidade fúngica, sendo um fator de virulência conhecido em algumas espécies do gênero Candida. O presente trabalho teve por objetivo detectar e avaliar a atividade de aspártico peptidases secretadas (Saps) e de superfície em sete isolados clínicos de C. haemulonii, provenientes de casos de candidíase cutânea. Para isso, os isolados foram cultivados a 37ºC em meio líquido YCB (base de carbono para leveduras) contendo BSA (albumina de soro bovino) a 0,1% como única fonte de nitrogênio, condição que sabidamente induz a expressão de Saps. O perfil de consumo de BSA ao longo do cultivo (24 a 96 h) in vitro dos isolados foi analisado em gel SDS-PAGE, sendo posteriormente realizada a dosagem química da atividade proteolítica utilizando-se substrato fluorogênico específico para a classe das aspártico peptidases. A detecção de aspártico peptidases associadas às células foi realizada por meio de citometria de fluxo utilizando anticorpos anti-Sap1-3 de C. albicans. Com os resultados obtidos, observou-se que cerca de 70% dos isolados apresentou atividade de aspártico peptidases secretadas observada pela degradação do BSA durante o crescimento. A dosagem química da atividade proteolítica secretada permitiu a quantificação da atividade enzimática, com valores de 225 a 250 unidades arbitrárias. O inibidor específico de Saps, pepstatina A, confirmou a classe das enzimas em questão. A detecção de homólogos às Saps 1-3 de C. albicans na superfície celular de C. haemunlonii revelou um porcentual de células marcadas variando de 24,6% a 79,1%, com média de intensidade de fluorescência entre 12,4 e 56,9. Nossos resultados demonstraram o potencial destes isolados em produzir e secretar aspártico peptidases, um importante fator de virulência produzido por espécies patogênicas do gênero Candida, sendo interessante prosseguir com estudos acerca do efeito dos inibidores de peptidases sobre a biologia celular e virulência destes isolados, estudos que já se encontram em fase de desenvolvimento.