Resumo

A emergência de enterobactérias resistentes a carbapenêmicos, determinadas pela produção de carbapenemases, constitui um relevante problema de saúde pública, pois limita drasticamente as opções terapêuticas. A New Delhi metalo ß-lactamase (NDM-1) emergiu na Índia e disseminou-se mundialmente, sendo hoje uma das principais carbapenemases em enterobactérias. Em abril deste ano, os dois primeiros casos de enterobactérias produtoras de NDM-1 no Brasil, ocorridos em hospital terciário de Porto Alegre, foram notificados pela ANVISA. Como parte de um estudo de epidemiologia molecular, iniciou-se a avaliação de isolados provenientes da instituição em que ocorreram os primeiros casos, onde no período de 15 de abril a 17 de maio foram identificados três Enterobacter cloacae resistentes a carbapenêmicos, que albergavam genes blaNDM. Baseado nesses dados o objetivo desse trabalho foi avaliar a possível localização plasmidial de genes blaNDM detectados em E. cloacae e sua expressão em Escherichia coli TOP10. Materiais e métodos: A extração plasmidial de cada isolado foi realizada conforme descrito por Birnboim e Doly e a seguir foi utilizada para transformar Escherichia coli TOP10 eletrocompetentes. Os transformantes foram selecionados em ágar LB contendo 4 mg/l de ceftazidima. A presença de genes blaNDM nos transformantes foi confirmada utilizando-se a PCR multiplex descrita por Poirel e colaboradores. Os produtos de PCR foram purificados com o kit GFX e sequenciados com o kit BigDye® Terminator Cycle Sequencing de acordo com instruções do fabricante. As sequências nucleotídicas foram comparadas com aquelas disponíveis no GenBank utilizando-se o programa BLAST. Os transformantes foram avaliados quanto às concentrações inibitórias mínimas para carbapenêmicos utilizando-se o Etest conforme instruções do fabricante, e quanto ao bloqueio com EDTA adicionado o discos de imipenem e meropenem conforme descrito por Nordman e colaboradores. O perfil plasmidial dos transformantes foi avaliado conforme descrito por Birnboim e Doly. Resultados e Discussão: Os transformantes obtidos de cada um dos isolados apresentaram elevação das CIMs para ertapenem (4 a 6 mg/l), imipenem (4 a 8 mg/l) e meropenem (1,5 a 3 mg/l) e bloqueio enzimático quando da adição de EDTA ao imipenem ou meropenem. O sequenciamento parcial dos amplicons evidenciou a presença do gene blaNDM-1. O perfil plasmidial dos transformantes sugere que os três isolados originais albergam um mesmo plasmídeo de aproximadamente 66 kbp. Conclusão: Os genes blaNDM detectados em E. cloacae em Porto Alegre tem localização em plasmídeo com cerca de 66 kbp.