Resumo

A criptococose é micose de caráter sistêmico adquirida por inalação de propágulos, sob forma de basidiosporos ou leveduras desidratadas. Manifesta-se como doença oportunista, cosmopolita, associada a condições de imunodepressão celular, causada principalmente por C. neoformans, importante causa de morte em AIDS. Objetivo: verificar a viabilidade de cepas de C.neoformans com e sem expressão de melanina preservadas a −20°C e −70°C na Coleção de Fungos Patogênicos do IPEC/Fiocruz. Método: 8 cepas de C.neoformans foram analisadas após três meses de preservação em −20°C e −70°C; para análise da viabilidade utilizou-se: a) “Teste de viabilidade e pureza” (TVP), com inoculação em placas com Ágar Sabouraud-cloranfenicol e Ágar Semente de Niger (ASN), e contagem das unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC⁄mL) após 72 horas; b) Método de citometria de fluxo (CFM) com o fluorocromo Acridine Orange, para avaliação imediata do percentual de morte celular através análise de 10.000 células. Resultado da análise de viabilidade expressa em UFC⁄mL: cepas a −20°C sem expressão de melanina: mediana 21,00 e média de 18,25; com expressão de melanina: mediana 134,00 e média de 91,28. Para cepas a − 70°C sem expressão de melanina: mediana 168 e média de 101,5 e com expressão de melanina: mediana 95,50 e média de 68,87.Para avaliação de morte celular por CFM expressa em percentagem de intensidade de fluorescência: cepas a −20°C sem expressão de melanina: mediana 35,50 e média 32,34 e com expressão de melanina: mediana 1,55 e média 7,47. Para isolados preservados em −70°C sem expressão de melanina mediana 5,74 e média 8,60 e com expressão de melanina foi: mediana 0,72 e média 1,46. Comentários: No método TVP, observou-se que a melanina teve papel protetor celular na criopreservação a −20ºC, enquanto que a −70ºC este efeito não foi observado, sendo necessário rever a metodologia utilizada (meio ASN para contagem de UFC em 72 horas). Quanto à analise de morte celular por CFM fica evidente o papel protetor da melanina, verificando-se que houve redução do percentual de morte nas cepas a −20ºC com expressão de melanina, com 1,55% (contra 35,5 sem melanina); e também a −70ºC, com 0,72% (contra 5,74 sem melanina). Este estudo piloto permitiu verificar que a melanina protege a célula durante a preservação em −20°C e −70°C e a citometria de fluxo com uso de Acridine Orange demonstrou ser mais uma ferramenta confiável para verificação de viabilidade celular de C. neoformans.