Resumo

Saccharomyces cerevisiae é uma levedura bem conhecida sendo um dos microrganismos mais úteis ao homem, com utilização ampla na indústria e na ciência. Nesta última área sua biogênese vem sendo pesquisada. Muitos mecanismos são sugeridos, mas o mecanismo exato para a liberação destas substâncias ainda não foi compreendido. Contudo, nosso trabalho mostra uma nova forma de exocitose avaliada por tomografia eletrônica, mas não pela via convencional onde parte das proteínas extracelulares e da membrana plasmática são secretadas pelo retículo endoplasmático (RE)/Complexo de Golgi-dependente e sim pela via inconvencional que é quando a secreção destas proteínas envolve a translocação para o lúmen do RE, em um processo que é dependente de um peptídio sinal na região N-terminal. Este processo não convencional de exocitose das vesículas geradas pela invaginação da membrana plasmática demonstra que estas espécies secretam uma boa parte de seu conteúdo citoplasmático para o meio extracelular.MATERIAIS E MÉTODO: O cultivo das células foi feito em meio de cultura Sabouraud Dextrose Broth (HIMEDIA), autoclavada e incubada na estufa e na rotação. O material foi lavado, fixado por congelamento por alta pressão, transferido para o aparelho de Substituição a frio, pós-fixadas com OsO4 2%, desidratadas em acetona, incluídas em Epon (TED PELLA INC.) e polimerizada em estufa à 60ºC por 48 horas. Os blocos foram cortados em um ultramicrótomo em cortes seriados ultrafinos recolhidos em grade de cobre do tipo fenda, contrastado com acetato de uranila e Citrato de Chumbo incubadas com ouro coloidal (marcador fiduciário no alinhamento para tomografia)Posteriormente o material foi analisado no MET. O processo de modelagem 3D foi realizado no pacote de programas freeware de reconstrução da IMOD. O alinhamento para a tomografia foi realizado no Etomo e o 3DMOD foi utilizado para processar e modelar as amostras alinhadas.DISCUSSÃO DOS RESULTADOS: A partir da reconstrução tridimensional por Tomografia Eletrônica da Saccharomyces cerevisiae foi observado uma forma não convencional de exocitose das vesículas geradas pela invaginação dependente da membrana plasmática.CONCLUSÃO: Com a reconstrução tridimensional foi observado um processo de invaginação da membrana plasmática com a formação de vesículas contendo conteúdo citoplasmáticos.