Resumo

INTRODUÇÃO: Acanthamoeba é um gênero ubiquitário e tem sido relacionado a vários casos de infecção do SNC (Sistema Nervoso Central) em cães imunocompetentes e imussuprimidos. As doenças do SNC causadas por esta AVL (Ameba de Vida Livre) são infecções graves, como encefalites crônicas, que quase sempre levam à morte e apresentam sintomas neurológicos semelhantes em humanos e animais. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram coletadas 96 amostras de mucosa nasal e de lesão de pele de 48 cães com suabes estéreis de modo aleatório e conservados em tubos esterilizados até seu processamento. Posteriormente os suabes foram colocados em tubo de centrifuga de 50 mL com água destilada esterilizada ficando em repouso por duas horas. Em seguida o material foi centrifugado e o sobrenadante desprezado. O sedimento foi ressuspenso em 500 µL de salina de Page, sendo retirados 100µL e inoculados em placas de Petri contendo ágar não-nutriente 1,5% com sobrecamada de Escherichia coli inativada. As placas foram incubadas a 30°C e examinadas diariamente em microscópio óptico por até 15 dias. Os isolados obtidos foram cultivados axenicamente em meio PYG [0.75% (m/v) proteose peptona, 0,75% (m/v) extrato de levedura e 1,5% (m/v) glicose] com antibióticos a 30°C. Para avaliação do efeito citopático, as células da linhagem VERO, cultivadas em meio E-MEM (Eagle’s Minimal Essential Medium) acrescido de 10 % de soro fetal bovino foram inoculadas em placa de 96 poços (4 x 10⁴ cél/mL) e incubadas a 37°C em 5 % de CO₂ por 24 horas. Em seguida foram adicionados os isolados na mesma proporção e incubados por 24h. A viabilidade celular foi mensurada através do ensaio de MTT [brometo de 3-(4,5-dimetil-2-thiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio]. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Das 96 amostras, 21 foram positivas para AVL: 10 a partir da mucosa nasal e 11 de lesões cutâneas. O gênero Acanthamoeba foi confirmado por PCR em 19 amostras positivas. Destas, sete foram sequenciadas e o genótipo foi determinado como T1 e T3 para os isolados de mucosa nasal, e T1 e T4 para os de lesão cutânea. Os isolados testados apresentaram efeito citopático nas células VERO. CONCLUSÃO: Em cerca de 20% das amostras isoladas foi confirmado o gênero Acanthamoeba, demonstrando a distribuição generalizada dessas AVL no ambiente. Portanto Acanthamoeba pode ter significado em veterinária, devido ao fato de 8 dos isolados apresentar potencial patogênico.