Resumo

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é subdividida em EPEC típica e EPEC atípica (aEPEC) com base na presença do plasmídeo EAF (EPEC adherence factor), apenas nas típicas. Demonstrou-se previamente o potencial invasivo das amostras aEPEC 1551-2, 1711-4 e EC423/03, em células HeLa e células intestinais polarizadas e diferenciadas (Caco-2 e T84). Neste estudo, a evolução temporal dos fenótipos de adesão, invasão e a persistência dessas amostras foi avaliada e comparada por ensaios cinéticos em células Caco-2 diferenciadas. As células foram infectadas com suspensão bacteriana (10⁸/mL) e incubadas por 1,5, 3 ou 6 h; a seguir, metade das monocamadas foi lisada com Triton X-100 (1%/30 min) e a outra metade foi tratada com gentamicina (100 ug/mL/1 h) para posterior lise e determinação do número de unidades formadoras de colônias (UFC) no ambiente intracelular. Os índices de invasão foram expressos como média da porcentagem de bactérias intracelulares em relação ao total de bactérias associadas (±erro padrão). Alternativamente, após 6 h, um grupo de monocamadas foi incubado com gentaminicina (100 ug/mL/até 24 h) para posterior lise e quantificação de bactérias internalizadas viáveis. Os experimentos foram realizados pelo menos três vezes em triplicata e os resultados foram analisados pelo teste t de Student. Observou-se que as amostras estudadas aderiram fracamente após 1,5 h, aumentando significativamente no período de 3 h, sem alteração significativa em 6 h. Enquanto bactérias internalizadas foram detectadas, a partir de 3 h para as aEPEC 1711-4 e EC423/03 (1,8x10³±0,4 UFC/ml e 8x10³±5,3 UFC/ml, respectivamente) e em 6 h (4,3x10⁴±0,9 UFC/ml e 8,9x10⁴±2,5 UFC/ml, respectivamente), aEPEC 1551-2 só apresentou bactérias internalizadas a partir de 6 h (8,4x10⁴±,3,1 UFC/ml). Os índices de invasão de 1551-2, 1711-4 e EC423/03 em 6 h não diferiram significativamente (4,2%±1,3, 4,1%±1,2 e 4,0%±0,8, respectivamente). Apesar da semelhança nos índices de invasão, apenas 1551-2 e 1711-4 persistiram intracelularmente até 24 h (32% e 50% das bactérias internalizadas, respectivamente), enquanto as UFC intracelulares de EC423/03 diminuíram significativamente (0,02%). É possível que as diferenças observadas estejam associadas a variações de expressão de genes de metabolismo ou de virulência nos diferentes períodos da interação de aEPEC com células intestinais in vitro.