Resumo

O estudo do impacto das características genéticas das diferentes subcepas de BCG nas suas propriedades imunomoduladoras é essencial para a compreensão do funcionamento da vacina e da resposta imune humana contra o M. tuberculosis. A vacina antituberculose usada no Brasil, Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guérin BCG Moreau, é única ao ter uma deleção da região de diferença RD16, de 7608 pb. A deleção resulta na truncagem de rv3405c, que codifica um regulador transcricional putativo do tipo TetR. Averiguamos o efeito desta truncagem na expressão do gene adjacente, rv3406, que codifica uma taurina dioxigenase putativa. Estudos de outros grupos detectaram transcrição de rv3406 em escarro de pacientes com tuberculose, e a inativação de rv3405c pode estar associada a um perfil de propagação alterado em modelo de infecção animal. Nossos experimentos de RT-PCR e western blot mostram que mRNA de rv3406 e Rv3406 são acumulados em BCG Moreau mas não em BCG Pasteur (subcepa de BCG que tem a RD16 intacta), sugerindo que a truncagem de rv3405c causa este efeito. Regiões sintênicas homólogas a rv3405c-rv3406 se restringem aos genomas das espécies do complexo de M. tuberculosis, algumas outras micobactérias, e de Segniliparus rugosus. Análise destas regiões intergênicas revela que há uma repetição invertida conservada que configura um sítio de ligação típico de fatores transcricionais bacterianos. Em ensaios de retardo em gel Rv3405c liga a região intergênica rv3405c-rv3406, mostrando que a proteína interage com esta sequência de DNA. Complementação de M. bovis BCG Moreau com uma cópia intacta de rv3405c abole acumulação de Rv3406, comprovando a atividade repressora de Rv3405c sobre rv3406. Antes do uso de lotes semente, a propagação de subcepas BCG comumente era feita em meio contendo bile bovina, rica em taurina e sais biliares. A interação de Rv3405c com DNA é inibida por sais biliares, mas não taurina, sugerindo que a deleção de RD16 compõe um knock in funcional que pode ter facilitado o uso da bile presente no meio. Adicionalmente, a similaridade estrutural entre sais biliares e ésteres de colesterol presentes em surfactante de pulmão sugere uma função para a região rv3405c-rv3406 no metabolismo de colesterol durante o processo infeccioso. Estes resultados mostram que Rv3405c é um repressor transcricional e sua truncagem em BCG Moreau pode configurar um ganho funcional.