Resumo

Com cerca de 100 milhões de casos novos estimados no mundo a cada ano, a infecção genital por Chlamydia trachomatis é a mais frequente doença sexualmente transmissível de etiologia bacteriana, afetando significativamente a saúde sexual e reprodutiva das mulheres. Esta infecção, se não diagnosticada, pode progredir para doença inflamatória pélvica (DIP), com sequelas graves como esterilidade, gravidez ectópica e dor pélvica crônica. A gravidade dessas complicações justifica a necessidade de ferramentas diagnósticas precisas para detectar C. trachomatis. A baixa sensibilidade dos métodos tradicionalmente empregados e o alto custo dos kits comercialmente disponíveis para detecção molecular de C. trachomatis reforçam a necessidade de pesquisas para o desenvolvimento de metodologias locais que utilizem a ferramenta molecular. OBJETIVO: aplicar a técnica molecular de PCR in house para o diagnóstico de C. trachomatis em espécime endocervical MATERIAL E MÉTODOS: foi coletado material endocervical de 158 mulheres atendidas no serviço ambulatorial da Fundação Santa Casa de Misericórdia do Pará (FSCMPa). A extração de DNA foi realizada pelo método de mini coluna, utilizando o kit PURE Link Genomic DNA Mini Kit (Invitrogen). Para PCR foi utilizado protocolo descrito por Mahony et al., (1995), amplificando um fragmento de 241 pares de base (pb) do plasmídio críptico de Chlamydia trachomatis. Os produtos amplificados foram visualizados em gel de agarose. Todas as amostras negativas foram submetidas a PCR do gene β-globina humana. Para efeitos de comparação, foi utilizado o kit comercial de captura híbrida C2 CT-ID DNA test v.2.0 (DIGENE). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Dezessete (11%) das 158 amostras de material endocervical submetidas a PCR in house para o diagnóstico de C. trachomatis foram positivas. Destas, 16 amostras foram confirmadas pela realização do teste de captura hibrida. Para uma amostra houve divergência no resultado (PCR positivo/captura negativo) e esta foi submetida a um novo PCR, com alvo específico para o gene OmpA (cromossomal) de C. trachomatis, confirmando o resultado positivo. O DNA dos 141 espécimes com resultado negativo foi amplificado para o gene β-globina humana, o qual foi positivo em todas as amostras, excluindo a possibilidade da presença de inibidores nas amostras clínicas. CONCLUSÃO: a implementação de novos testes para o diagnóstico laboratorial de C. trachomatis é uma necessidade. O método de PCR proposto neste trabalho é uma ferramenta rápida e de baixo custo, que apresentou excelente concordância com método comercial (captura hibrida), inclusive detectando um caso falso-negativo.