Resumo

Os microrganismos marinhos representam uma importante fonte de recursos genéticos para o avanço biotecnológico. Os recifes de corais por abrigarem diversas associações mutualísticas tornam-se uma fonte relevante para descobertas de novos compostos bioativos. Este estudo teve como objetivo realizar triagem da biblioteca metagenômica de amostras de coral para prospecção de clones com atividade para enzima amilase. Amostras de corais Siderastrea stellata foram coletadas da Baía de Camamu, município de Barra Grande, Bahia, e encaminhadas ao laboratório sob refrigeração. Os espécimes foram macerados e deixados sob agitação durante 24 horas em tampão fosfato de sódio, pH 7,5 acrescido de 1% de pirofosfato de sódio e Tween. Após centrifugação, o sobrenadante foi submetido à extração de DNA através do kit E.Z.N.A. Soil DNA. A biblioteca metagenômica de fosmídeo foi costruída de acordo com CopyControl^TM Fosmid Library Production Kit com pCC1FOS ^TM Vector (Epicentre). Para detecção dos clones positivos a triagem foi realizada em meio sólido Luria-Bertani Agar ou LA modificado, (Sambrook; 1989). Ao meio LA modificado adicionou-se amido 0.01% como substrato, L - arabinose 0.01%, que induz a ampliação do número de cópias do vetor por célula e o antibiótico cloranfenicol 12,5 µg/mL, correspondente à resistência do fosmídeo. As placas foram inoculadas e após 72 horas, tempo de crescimento, elas foram coradas com solução de iodo (KI 50 g/L e I2 2,03 g/L) para visualização dos halos de hidrólise. Entre os 3360 clones testados, foram identificados 2 clones positivos para atividade amilase. A metagenômica têm se mostrado uma técnica útil para uma análise do repertório genético de populações complexas, uma vez que ultrapassa as limitações das técnicas tradicionais de cultivo que acessam apenas uma pequena parcela dos microrganismos.