Resumo

Bactérias do filo Acidobacteria são predominantes em solos de Cerrado do Centro-Oeste brasileiro. Esse filo representa mais de 50% das sequencias do gene do RNAr 16S em estudos de diversidade molecular. Até o momento, seis genomas de Acidobacteria estão disponíveis no banco de dados. Essa análise demonstrou a presença de genes para várias enzimas hidrolíticas, como celulases, xilanases e quitinases. As xilanases e celulases têm aplicações importantes na produção de etanol de segunda geração na degradação da biomassa. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de genes que codificam enzimas hidrolíticas provenientes de acidobacterias utilizando abordagem de genômica funcional. Uma biblioteca genômica de pequenos insertos (4 a 8 Kb) foi construída utilizando o Kit de clonagem pCC1BAC. Essa biblioteca contém aproximadamente 15.000 clones utilizando-se DNA de uma acidobacteria isolada em um estudo anterior de solo de Cerrado. A triagem de 1100 clones foi realizada para atividade xilanolítica e celulolítica observada em meio sólido, utilizando meio LB acrescido de xilana ou celulose. Após 16 horas de crescimento a 37°C, as colônias foram incubadas por 12 dias à temperatura ambiente. Os halos de degradação foram evidenciados utilizando-se o corante “vermelho do Congo” e ácido clorídrico. Após a triagem, 32 clones foram escolhidos para confirmação da atividade xilanolítica e 37 clones foram escolhidos para confirmação da atividade celulolítica. Destes, 5 clones com atividade xilanolítica e 3 com atividade celulolítica foram escolhidos para continuação da análise. Estes clones foram re-transformados e cinco colônias de cada clone foram selecionadas para a análise da confirmação da atividade xilanolítica e celulolítica. Os clones tiveram sua atividade hidrolítica confirmada e aqueles que apresentaram maior atividade foram estocados e tiveram as suas extremidades sequenciadas. Embora as atividades xilanolítica e celulolítica tenham sido confirmadas, o sequenciamento ainda não foi suficiente para confirmar se os genes presentes que codificam para a produção de enzimas com as atividades de interesse.