Resumo

Em processos fermentativos, em que componentes constituintes destes podem interagir entre si, influenciar no efeito de outros parâmetros e na produção da molécula alvo, é essencial a utilização de um método de otimização que permita detectar essas possíveis interações, de modo a otimizar as condições experimentais. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar a influência de diferentes variáveis na produção de proteases por Aspergillus aculeatus URM 6603 utilizando um planejamento fatorial 2⁴. As quatro variáveis avaliadas no processo fermentativo foram: concentração de extrato de palma (0,5; 1,0 e 1,5%), concentração de farinha da entrecasca de mandioca (1,5; 2,0 e 2,5%), tempo de fermentação (72, 96 e 120h) e concentração do inóculo (10⁵, 10⁶ e 10⁷ mL^-1 de substrato). Aspergillus aculeatus URM 6603 foi obtido da Coleção de Culturas – Micoteca URM, do Departamento de Micologia da Universidade Federal de Pernambuco. Os sistemas fermentativos foram preparados em frascos Erlenmeyers de 125 mL de capacidade nas diferentes condições de ensaios do planejamento fatorial, incubados a 30 ºC e sob agitação de 120 rpm. A protease produzida foi obtida do meio de produção por filtração e a atividade proteásica foi determinada por mistura reacional de 60 µL do material filtrado e 100 µL de azocaseína a 1% em tampão Tris-HCl (pH 7,2 a 0,2 M) com posterior interrupção da reação com a adição de 480 µL de ácido tricloroacético e 560 µL de NaOH . A leitura foi realizada a 440 nm em espectrofotômetro. O melhor resultado da atividade total foi obtido no ensaio utilizando concentração de palma a 1,5%, concentração de farinha da entrecasca de mandioca a 2,5%, concentração do inóculo a 10⁷ mL^-1 e tempo de fermentação de 72 horas, com atividade total de 5,90 U mL^-1. Todos os componentes constituintes avaliados no planejamento estatístico, bem como suas interações, foram significantes para a produção da protease, com maior efeito causado pela interação entre o tempo e a concentração da palma. As concentrações da farinha da entrecasca de mandioca, do extrato de palma e do inóculo afetaram positivamente a produção, enquanto que o tempo de fermentação afetou negativamente. Com base na análise estatística, torna-se necessária a realização de outros planejamentos fatoriais, a fim de otimizar a produção da protease por Aspergillus aculeatus URM 6603.