Resumo

Streptococcus mutans (SM) é o principal patógeno oral da cárie dentária e endocardite infecciosa. SM produz polissacarídeos extracelulares (PECs) a partir da sacarose, importantes para formação da matriz extracelular do biofilme. Para isto, SM utiliza sistemas reguladores de transcrição de dois componentes (SDC). Dois SDCs, VicRK e CovR, foram implicados na virulência de SM, em parte pois regulam a produção da matriz de PECs a partir da sacarose e podem desempenhar função de escape a fatores de defesa do hospedeiro. Enquanto VicRK regula positivamente a produção de PEC, CovR regula negativamente. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da inativação destes SDCs na susceptibilidade à opsonização pelo sistema complemento na presença e/ou ausência de sacarose. Para isto, a marcação pelo complemento foi comparada entre as cepas SM UA159 e os mutantes vicK- e covR- (designados UAvic e UAcov, respectivamente), após incubação com soro humano a 20% (20 min, 37ºC, 10% CO2). Cepas incubadas somente com PBS foram usadas como controle negativo. As cepas foram crescidas em meio BHI com ou sem 0,1% de sacarose, tratadas ou não com 0,5M HCl para remoção de PECs. A quantidade de C3b nas superfícies bacterianas foi determinada com auxílio de citômetro de fluxo (FACSCalibur) após marcação de C3b com anticorpos IgG anti-C3 humano conjugado com FITC. Os dados foram analisados por ANOVA 2-Way com pós-teste de Tukey. Sob crescimento em BHI, a deposição de C3b foi 3 vezes menor em UAcov (9,4%) e UAvic (6,6%), comparado à UA159 (24,2%) (p<0,05). O crescimento bacteriano na presença de sacarose reduziu significativamente a deposição de C3b nas cepas estudadas (p<0,05), quando comparado com meio sem sacarose. Na cepa UAcov, a qual tem altas quantidades de PECs na superfície, o tratamento com HCl promoveu aumento significativo na deposição de C3b (16,7% em relação a cepa não tratada; p<0,05). Entretanto, UAcov tratado com HCl ainda sofre deposição de C3b significativamente menor do que UA159 (p<0,05), sugerindo que outros componentes de superfície de SM além da presença de PECs, influenciem na susceptibilidade de SM à deposição de C3b. Assim, a inativação dos sistemas VicRK e CovR reduz a deposição de C3b do complemento, indicando que estes SDCs regulam genes envolvidos no escape à opsonização.(Apoio: FAPESP N° 2012/04222-5 e 2012/50996-6).