Resumo

INTRODUÇÃO: A cultura pelo método Lowenstein Jensen-LJ do espécime clínico para a tuberculose é atualmente o padrão ouro para o diagnóstico de infecções por micobactérias. A identificação do complexo Mycobacterium tuberculosis (MT), consiste na realização de cultura do espécime clínico seguida de diferentes provas bioquímica, apesar de ser um método sensível e específico é trabalhoso e demorado, em torno de 28 a 60 dias para a obtenção do resultado. Vários são os estudos que tem sugerido diferentes técnicas moleculares para o diagnóstico etiológico das MTs. A técnica molecular referida como PRA-hsp65, baseia-se na análise de um fragmento do gene da hsp65 encontrado em todas as espécies de micobactérias. Consiste em uma etapa inicial de amplificação seguida por digestão enzimática do fragmento amplificado. Este método oferece uma abordagem rápida, precisa na identificação do complexo MT. OBJETIVO: Padronização da técnica de PRA-hsp65 juntamente com os demais testes de fenotipagem na rotina laboratorial para identificação do complexo MT. MÉTODO: Foram incluídas no estudo 32 culturas com padrão fenotípico para o complexo MT, identificadas no LACEN-RN no período de Jan a Dez de 2012, entraram no estudo culturas positivas, identificadas fenotipicamente pela produção de fator corda e pelas provas bioquímicas recomendadas pelo Ministério da Saúde. As colônias bacterianas foram submetidas a uma etapa de extração do DNA genômico com posterior identificação molecular à partir da amplificação do fragmento Hsp65 seguida de digestão; técnica recomendada por Telenti et al, 1993. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foram identificadas genotipicamente 28 amostras pertencentes ao complexo MT e 04 micobactérias não tuberculosas (MNT), confirmando os resultados obtidos anteriormente pelos métodos fenotipagem realizados no LACEN-RN. CONCLUSÃO: O presente estudo revelou que é possível implantar o método PRA-hsp65 na rotina laboratorial do LACEN juntamente com os demais métodos fenotípicos, e que o mesmo poderá contribuir para uma identificação mais rápida,segura e precisa de diferentes espécies de micobactérias.