Resumo

Introdução. A crescente quantidade de áreas poluídas por hidrocarbonetos no mundo é uma realidade que afeta cada vez mais a sociedade. Perante este cenário a biorremediação com bactérias é uma alternativa. Visando desenvolver propostas que contribuam a seu conhecimento e aprimoramento, com a presente pesquisa procurou-se o isolamento e identificação de cepas bacterianas de solo de um posto de combustível (S20°47´08.8”, WO49°21´15.1”) com histórico de contaminação por hidrocarbonetos. Materiais e Métodos. Meios de cultura: Meio Líquido Nutritivo (MLN), Meio Sólido Nutritivo (MSN), Meio Líquido Mineral (MLM), Meio Sólido Mineral (MSM), pH 7.0±0.1, temperatura 27°C. Determinou-se a população de heterótrofos totais (HT) e de degradadores de hidrocarbonetos (DH) pelo método respirométrico com tricloro trifenil tetrazolium (TTC) com diluições crescentes em microplaca. Três cepas com cor diferente tiveram repicagens sucessivas em MSM até isolados puros. As fontes de carbono e energia testadas foram fenol 5 mM e querosene 2% v/v. A identificação foi por técnicas de biologia molecular na seguinte sequência: extração do DNA genômico, PCR de amplificação das sequências do gene RNAr 16S, clonagem dos amplicons com vector plasmidial, transformação de células competentes de E. coli DH5-α, extração do plasmídeo, PCR de sequenciamento, precipitação dos fragmentos amplificados e sequenciamento. As sequências foram comparadas com bases de dados do GenBank. Resultados. Número mais provável de HT 2,48 x10-10 ml-1 e 1,17 x10-10 ml-1 de DH. Características: gram-negativas, catalase positivas, oxidase positivas, ágar citrato simmons positivas e mobilidade positivas. Suportaram concentrações crescentes de fenol 3 ate 21 mM e de querosene 2% ate 8%. A cor das culturas mudou de transparente para amarelo, o pH para ácido e o querosene apresentou emulsificação. As sequências tinham 99% de identidade com Pseudomonas entomophila L48, Pseudomonas putida GB-1 e Pseudomonas putida KT2440. Discussão. A mudança na cor sugere a presença de compostos intermediários de degradação via meta-clivagem. O aumento da tensão superficial pode obedecer à diminuição de sais em solução. A utilização de consórcios é analisada como opção para uma degradação completa. Nem todas as cepas viáveis usam o TTC como aceitor de elétrons na cadeia respiratória aeróbica. Conclusão. Os solos com histórico de contaminação por hidrocarbonetos são uma via certa para obter cepas bacterianas capazes de degrada-los.