Resumo

Entre as espécies mais importantes de anaeróbios associados com os seres humanos, Bacteroides fragilis desempenha um importante papel no trato gastrointestinal, tanto como um membro da microbiota quanto como agente patogênico oportunista, causando principalmente abcessos e bacteremia. B. fragilis expressa vários fatores de virulência, tais como fímbrias e aglutininas, complexo polissacarídeo capsular (CPC) e uma variedade de enzimas. B. fragilis também tem significativa tolerância ao oxigênio e resistência a vários antimicrobianos, o que pode contribuir para a manutenção e a progressão da infecção. Proteínas da família MarR são reguladoras da transcrição que se ligam diretamente ao DNA e controlam processos fisiológicos em bactérias e archaeas, incluindo a resposta ao estresse oxidativo, a resistência aos antibióticos e a produção de factores de virulência. Três proteínas homólogas ao MarR foram detectadas na cepa 638R de B. fragilis. Assim, o nosso estudo é destinado à construção de dois mutantes que superexpressam proteínas da família MarR em B. fragilis, referidas aqui como BmrR I e II (BF3296, BF3863), sob o controle de um promotor induzível para análise fenotípica e a expressão das mesmas em E. coli para posterior purificação. Para a superexpressão das proteínas em B. fragilis, os genes bmrR I e II foram amplificadas por PCR, onde os iniciadores foram flanqueados por sítios de enzimas de restrição, e clonados em um vetor induzível por maltose, pFD1045. O plasmídeo contendo o gene de interesse foi introduzido por eletroporação em E. coli e, em seguida, transferido para B. fragilis por conjugação triparental. As duas estirpes de B. fragilis que superexpressaram as proteínas foram testadas para a resistência aos antibióticos e utilizadas em ensaios de exposição ao oxigênio. As estirpes construídas exibiram maior sensibilidade a vários antimicrobianos testados, tais como tetraciclina, ciprofloxacina, imipenem e tigeciclina quando cultivadas em meio definido suplementado com maltose como única fonte de carbono. A superexpressão de proteínas semelhantes a MarR também reduziu a capacidade de B. fragilis de resistir ao estresse oxidativo. Nossos resultados indicam que a superexpressão de proteínas semelhantes a MarR pode estar inibindo a expressão de genes de bombas de efluxo envolvidos na desintoxicação da célula bacteriana.