Resumo

As bactérias promotoras do crescimento vegetal têm sido estudadas visando sua aplicação como bioinoculantes, numa alternativa aos fertilizantes químicos. No entanto, o processo de colonização da planta por essas bactérias é prejudicado quando tais micro-organismos estão sob estresse osmótico. Gluconacetobacter diazotrophicus é uma bactéria endofítica fixadora de nitrogênio capaz de colonizar raízes e parte aérea de muitas espécies vegetais. Uma das características de maior relevância desse micro-organismo é a elevada tolerância ao estresse osmótico, sendo capaz de crescer em até 30 % de sacarose. O presente trabalho teve como objetivo identificar genes relacionados ao estresse osmótico em G. diazotrophicus PAl 5. Mutantes sensíveis ao estresse osmótico foram selecionados a partir de uma biblioteca contendo 2227 mutantes de inserção do transposon Tn5, utilizando meio de cultivo LGIm suplementado com 0,6 M de sacarose, 0,1 M de NaCl ou 0,2 M de Na2SO4. O DNA genômico desses mutantes selecionados foi isolado e digerido com a enzima de restrição EcoRI. As regiões flanqueadoras do transposon foram recuperadas por auto-ligação do produto da digestão seguido de transformação em células competentes de Escherichia coli (pir-). O DNA plasmidial dos transformantes foi isolado e sequenciado. O alinhamento das sequências foi realizado com o banco de dados do NCBI utilizando o algoritmo BLASTn. Um total de 149 mutantes tiveram o crescimento afetado negativamente quando submetidos aos estresses. A análise das sequências permitiu a identificação de vários genes, entre eles: transportadores ABC, reguladores transcricionais, transportador de potássio (Kup), proteínas envolvidas na biossíntese de polissacarídeos, proteínas de resistência à acriflavina (Acr), proteína de resistência a multidrogas (Mdt), proteínas envolvidas no metabolismo de trealose (TreA; OtsA). Além disso, proteínas hipotéticas foram identificadas, sugerindo a existência de proteínas ainda não caracterizadas, importantes para a tolerância ao estresse osmótico. A identificação desses genes em G. diazotrophicus, fornece novas informações para o entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos com a capacidade desse micro-organismo, em tolerar altos níveis de estresse osmótico. Suporte financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ e INCT-FBN.